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背景与目的:在全世界肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位,其中接近85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),确诊时80%以上是中晚期肺癌,其5年生存率不足20%。表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)已经成为具有EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者的一线治疗方案,可显著延长此类患者的无进展生存期(progress free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS),在亚裔非吸烟的女性患者中,EGFR突变比例可高达60-70%,明确EGFR基因状态对指导后续靶向用药治疗至关重要。一直以来,传统分子伴随诊断需要基于组织标本,血浆循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ct DNA)基因突变检测可克服组织检测的异质性,对患者不造成创伤,操作方便快捷,并能够反复获取,易于实时监控,是无法获得组织活检样本的晚期患者的选择,但ct DNA在血液中含量极微,需要技术的不断改良才能提高检测的灵敏度。单分子PCR(single molecule-PCR,SM-PCR)技术能实现对DNA片段的单基因突变检测,具有超高灵敏度和特异度。本研究主要探讨SM-PCR技术检测血浆ct DNA在晚期肺腺癌患者治疗中的应用。材料和方法:收集2017年6月至2018年5月就诊于天津医科大学肿瘤医院晚期肺腺癌患者30例,使用SM-PCR技术富集血液样本目标基因(EGFR、KRAS、BRAF、ALK、HER2、TP53)区域的ct DNA片段,构建测序文库,再进行高通量测序,全面检测突变信息。使用基于扩增阻滞突变系统(amplication refractory mutation system,ARMS)实时荧光PCR法进行肿瘤组织样本EGFR检测,比较血浆与组织样本EGFR基因突变检测结果的一致性,并对血浆与组织EGFR突变检测位点结果比较,查阅病历获取患者的临床资料信息,分析血浆EGFR突变状况与临床病理特征的关系。结果:1.对30例IIIB及IV期肺腺癌患者的组织与血液基因检测进行一致性分析,一致性93.3%(28/30),灵敏度86.70%(13/15),特异度100%(15/15),阳性预测值100%(13/13),阴性预测值88.2%(15/17);Kappa一致性检验说明两种方法检测结果一致性较好(Kappa=0.867,P<0.001);Mc Nemar检验亦提示检测结果没有统计学差异(P=0.500)。2.对15例组织EGFR突变检测阳性和13例血浆EGFR突变检测阳性的检测位点结果进行比较,基于SM-PCR技术的ct DNA检测不仅可以分析ARMS-PCR可检测的位点,还可分析三代EGFR-TKI常见的耐药突变C797S,并且可以分析T790M和C797S的顺反式结果,评估患者是否适合一代TKI联合三代TKI治疗。3.30例患者中血浆EGFR突变状况,与年龄、肿瘤家族史、体力状态评分及疾病分期无显著相关性,与性别(P=0.033)、吸烟史(P=0.001)呈显著性相关,差异具有统计学意义。结论:我们观察到在晚期肺腺癌中,基于SM-PCR技术的血浆ct DNA检测EGFR突变与组织样本的ARMS-PCR检测结果的一致性非常高,可控制测序文库质量,与二代测序结合有助于全面检测突变信息。其目标检测位点比ARMS-PCR技术的检测位点全面(特别是耐药位点),同时检测多种突变,且分析结果更精细,可实现绝对定量,同时控制成本,未来随着SM-PCR技术的普及以及相关检测试剂盒的开发,基于SM-PCR技术的血浆ct DNA基因突变检测方法将会更好的指导临床。