本文以春石斛(Dedrobium.Pink BEAUTY’Queen’×Dendrobium.Pink GEM’ELEGANCE’)为实验材料，进行春化处理：23±1℃／10±1℃[12h／12h(白天／晚上)]，研究低温对春石斛花芽诱导和分化的效应，在不同时间取样，分析测定了叶片中的碳水化合物，植物各内源激素，EST，POD，SOD同工酶活性及酶谱变化，克隆了与植物开花相关的MADS-box家族的基因，D-MADS，并进行了同源比对及进行叶片、叶芽、不同阶段花芽中的半定量RT-PCR分析。主要实验结果如下：(1)春石斛在40d左右完成春化，芽诱导率达98％，且100％的芽为花芽，2～3朵／节的比例高达80％，每枝有14朵以上的花；未完成春化的植株，芽诱导率低，且大部分发育成叶芽。(2)在低温处理过程中，碳水化合物含量发生变化。在处理的前20d，可溶性糖含量显著增加，随后降低，30d后，糖含量继续增加，40d时达到高峰，179.03mg／g。在处理早期(20d内)淀粉含量逐渐降低，处理20d后又显著上升，40d出现高峰，达到632.96mg／g。处理期间，对照淀粉含量几乎保持不变。淀粉含量与可溶性糖含量变化趋势相反，表明糖含量的增加可能来自淀粉的分解。(3)低温处理过程中，玉米素变化呈双峰曲线。分别在20d和35d达到峰值；IAA含量逐渐增加，20d达到高峰(约为60pmol／gFW)，并维持到30d，随后降低；赤霉素呈递增趋势，在35d达到最高水平(约为48pmol／gFW)，并保持较高水平到45d，随后含量逐渐降低：ABA含量在处理前期(10d内)显著增加，第10d达到最高水平(约为51pmol／gFW)，随后下降，并保持较低水平。IAA／Z在5～35d之间有显著的增加，在35d后又大大降低，几乎与对照保持一致。表明植物内源激素与植物开花有着密切的关联。(4)在处理期间，SOD，POD，EST活性随花芽发育有着明显波动。从EST酶谱上看，春化期间有酶带的消失和重现。春化完成时，出现新的酶带(R_f=0.609)。SOD酶带发生较大的变化，春化完成后，R_f=0.400酶带消失。以上表明同工酶与春化存在一定的关系。(5)根据植物cDNA-3’末端序列的特殊性设计引物(引物2：5’-GACTCGAGTC GATCG ATTTT TTTTT TTTTT TTT-3’)进行cDNA一链的合成，并根据MADS-box基因的保守区域设计上游引物(即引物1：5’-GATCAAG(A／C)G(G／C)ATCGAGAA-3’)，克隆得到895 bp的片段，序列分析表明该MADS-box基因的cDNA中包含一个738 bp读码框(ORF)，是编码246个氨基酸的MADS-box基因，命名为D-MADS。序列多重比较表明D-MADS与球花石斛(Dendrobium thyrsiflorum)的DthyrFL1具有97％的相似性，对应的蛋白序列与拟南芥的AP1蛋白具67％的同源性，与球花石斛蛋白DthyrFL1且具有95％的相似性。通过半定量RT-PCR测定D-MADS在春石斛不同组织和花芽发育不同时期的表达情况，结果显示D-MADS在叶和叶芽中均不表达，但随着花的发育，它的表达不断增强。以上结果进一步表明本实验所克隆的D-MADS基因与春石斛花芽发育密切相关。