马铃薯Y病毒的核酸点杂交检测试剂盒的研制

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:tc13709479876
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根据已报道的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)分离物CP基因序列,设计简并引物,利用RT-PCR扩增了PVY坏死株系CP基因的部分片段。核酸序列分析表明,该序列含有413个核苷酸,与北京PVY分离物同源性为97.8%,与法国PVY~N以及加拿大PVY~O同源性均为97.6%,与美国PVY的分离物同源性为97.1%。 通过PCR方法制备DIG标记的PVY cDNA探针,利用该探针研制了核酸点杂交检测试剂盒,该试剂盒在国内首次采用不需研磨样品的黄原酸钾(PEX)方法快速提取核酸,此方法可有效避免植物组织内RNA酶对病毒RNA的降解。 比较该试剂盒、RT-PCR方法和ELISA方法的灵敏度,试剂盒的灵敏度(200ng病叶中的病毒)明显高于ELISA方法(灵敏度为100ug病叶中的病毒),虽低于RT-PCR方法(灵敏度为8ng病叶中的病毒),但已满足检测的需要,而且该试剂盒不需要特殊的仪器。 与国内同类报道相比,该试剂盒具有灵敏、简单、快速、经济的优点,适合于一般的实验室进行大量马铃薯脱毒苗的检测工作。
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