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第一部分成年小鼠创面愈合中SDF-1α的表达特点目的:探讨成年小鼠全层皮肤缺损伤创面愈合过程中创面基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α, SDF-1α)的表达特点及其影响因素。方法:雄性6~8周龄昆明种小鼠32只,建立背部正中近颈侧皮肤1.5×1.5cm的全层缺损伤模型,分别于伤后1、2、3、4、5、7、10和14d随机处死4只小鼠并切取包括创缘有皮肤侧0.3cm的创面组织,切取正常小鼠皮肤作为对照组。应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学方法分别检测SDF-1αmRNA和蛋白表达。结果:RT-PCR结果显示正常皮肤组织构成性表达SDF-1αmRNA。创面愈合过程中SDF-1αmRNA呈双峰表达,峰值位于伤后第1d和5d。与正常皮肤组织相比,伤后1d的SDF-1αmRNA表达显著增加(P<0.05),3d表达最低(P<0.05),5d表达达峰值(P<0.05),以后又逐渐下降,10d仍维持较高水平(P<0.05);免疫组织化学检测发现,SDF-1α主要表达在毛囊、真皮成纤维细胞、血管内皮细胞和新生表皮细胞。结论:皮肤创伤愈合过程中创面SDF-1αmRNA呈双峰表达;SDF-1α参与了皮肤的创伤愈合过程,其表达特征提示炎症反应对SDF-1α表达具有重要影响。第二部分促炎细胞因子对皮肤成纤维细胞表达SDF-1α的影响目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)对皮肤成纤维细胞表达SDF-1α基因的影响。方法:采用组织块法分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,分别用不同浓度的TNF-α和IL-1(均为0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL)作用于成纤维细胞48h后收获细胞,对照组仅加培养基,不加任何刺激物。应用RT-PCR法检测细胞SDF-1α的基因表达。结果:正常小鼠皮肤成纤维细胞构成性表达SDF-1αmRNA。低浓度(0.1ng/mL)TNF-α和IL-1均能显著抑制成纤维细胞的SDF-1αmRNA表达(P<0.05),并随着浓度的增加,其抑制作用逐渐增强;相同浓度的TNF-α组和IL-1组间没有显著差异(P>0.05)。结论:低浓度促炎细胞因子(TNF-α和IL-1)能够抑制成纤维细胞SDF-1α基因表达,其抑制作用具有明显的浓度依赖性,提示促炎细胞因子对SDF-1α基因表达具有明显的负调控作用。第三部分SDF-1α在皮肤创伤愈合过程中的作用研究第一分题创面SDF-1α对骨髓来源细胞的诱导作用目的:探讨创面SDF-1α在诱导骨髓来源细胞(bone marrow derived cells, BMDCs)募集到达创面过程中的作用。方法:采用直接培养法分离培养小鼠骨髓来源细胞(BMDCs),并通过CXCR4免疫荧光鉴定BMDCs。培养的BMDCs分为正常培养组(BMDCs组)和CXCR4抗体共孵育组(100ng/mL, anti-CXCR4组),用细胞示踪剂叶绿素甲基-1,1’二(十八烷基)-3,3’,3’,3’-四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐(Chloromethyl 1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindoc- arbocyanine perchlorate, CM-DiI)标记后分别将各组BMDCs注入全层皮肤缺损伤小鼠模型的尾静脉,同时以注射DMEM/F12无血清培养基作为对照组,观察创面标记的BMDCs数量及创面愈合率。结果:(1) BMDCs均表达CXCR4;(2)在伤后7d和14d,BMDCs组的创面愈合率显著高于anti-CXCR4组和对照组(P<0.05),而anti-CXCR4组的创面愈合率仅在伤后14d显著高于对照组(P<0.05);(3)在伤后7 d和14d,BMDCs组创面标记的BMDCs数目显著高于anti- CXCR4组(P<0.05)。结论:BMDCs参与了皮肤创面愈合过程,并且对创面修复具有显著的促愈作用;通过抗体阻断SDF-1α与其特异性受体CXCR4的相互作用,提示SDF-1α在诱导BMDCs募集到达创面过程中具有重要作用。创面愈合率第二分题SDF-1α对皮肤创面新生血管形成的影响目的:探讨创伤愈合过程中SDF-1α在创面新血管形成中的作用。方法:建立小鼠背部皮肤全层缺损伤模型(1.0×1.5 cm),随机分3组:对照组(注射DMEM/F12无血清培养基)、抗体组Ⅰ(注射10 ng/μL SDF-1α抗体)和抗体组Ⅱ(注射20 ng/μL SDF-1α抗体),抗体组试剂用DMEM/F12无血清培养基配制。各组分别在创面及创周连续6d注射30μL的相应试剂。应用RT-PCR方法检测伤后3、4、5、6和7d创面CD146 mRNA的表达,并观察创面微血管密度及创面愈合率。结果:(1)与对照组相比,抗体组Ⅰ和抗体组Ⅱ伤后各天的CD146 mRNA表达均显著减少(P<0.05),在伤后5～7d,抗体组Ⅱ的CD146 mRNA表达显著低于抗体组Ⅰ(P<0.05);(2)与对照组相比,抗体组Ⅰ的创面愈合率在伤后6d和7d显著降低(P<0.05),抗体组Ⅱ的创面愈合率在伤后5～7d显著降低(P<0.05),两抗体组间的创面愈合率仅在伤后第7d有显著差异(P<0.05);(3)抗体组Ⅰ和抗体组Ⅱ于伤后各天的创面微血管密度均显著少于对照组(P<0.05),在伤后5～7d,抗体组Ⅱ的创面微血管密度显著低于抗体组Ⅰ(P<0.05)。结论:SDF-1α具有促进创面新生血管形成的作用,对于改善愈合速度和提高愈合质量具有潜在的应用价值。