抗除草剂bar基因工程菌构建与草莓叶片再生体系的研究

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为探索草莓抗除草剂bar基因转化高效方法,试验利用三亲杂交法,将构建的真核表达载体pBI121-bar转入根癌农杆菌菌株LBA4404,对菌落PCR、质粒PCR和质粒双酶切产物进行电泳检测,用构建的工程菌转化草莓试管苗。并且本试验以适合安徽省栽培的草莓(Fragaria ananassa Duch)优良品种——丰香为试材,通过对叶片愈伤组织诱导、生根培养筛选研究,建立起草莓简单、快速、高效的叶片离体再生体系,为草莓利用发根农杆菌进行抗除草剂bar基因转化研究奠定基础。试验研究获得的主要结果如下:1、利用三亲杂交法将真核表达载体pBI121-bar转入根癌农杆菌LBA4404,通过菌落PCR、质粒PCR、质粒双酶切电泳检测,证明工程菌构建成功。2、试验筛选出草莓试管苗、叶片愈伤组织分化阶段的适宜选择压分别是浓度为25 mg/L和20 mg/L的卡那霉素。3、对工程菌进行抗生素浓度的筛选,Cef与Carb有效抑菌浓度均为200 mg/L。4、不同6-BA、NAA组合对草莓叶片不定芽无诱导作用,只能诱导愈伤组织。5、应用SPSS软件分析,得出诱导叶片不定芽的最佳培养基是:MS+TDZ1.5mg/L+IBA 0.4 mg/L。6、丰香生根的最适培养基分别为是:1/2MS+IBA 0.1 mg/L。7、对发根农杆菌R1601抑制抗生素Carb浓度筛选,Carb有效除菌浓度为500mg/L。8、当发根农杆菌R1601的菌液OD600值=0.6时,对草莓叶片毛状根的诱导频率最高,而高于或低于该密度,诱导率都呈下降的趋势。
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