目的:探索白藜芦醇、红景天苷与氮氧自由基结构衍生物的抗辐射活性。方法:采用CCK-8法检测部分白藜芦醇、红景天苷和氮氧自由基结构衍生物对BALB/c小鼠脾脏细胞存活率的影响;DCFH-DA荧光探针标记法检测结构衍生物对辐射诱导的BALB/c小鼠脾脏细胞内ROS水平的影响;采用CCK-8法,DCFH-DA荧光探针标记法检测Jurkat T细胞,进行实验条件摸索,建立筛选体系并对化合物进行筛选;Annexin-V/PI双染法法检测结构衍生物对辐射诱导的Jurkat T细胞凋亡的影响,以筛选出具有一定辐射保护效应的苗头化合物;PI染色法评价苗头化合物对辐射诱导的Jurkat T细胞周期阻滞的影响;为进一步探究苗头化合物的抗辐射保护作用机制,以Western blot法检测苗头化合物对凋亡相关蛋白及其信号通路中关键蛋白的表达水平的影响;用JC-1荧光探针掺入法检测苗头化合物对辐射诱导的Jurkat T细胞线粒体膜电位变化的影响;细胞色素c检测法评价苗头化合物对辐射诱导的Jurakt T细胞线粒体产生和释放细胞色素c的影响。结果:(1)BALB/c小鼠脾脏细胞的辐射敏感性较高,具有中等辐射敏感性的Jurkat T细胞更适合此项研究,并摸索出最适的实验条件,建立了稳定有效的筛选体系。(2)细胞存活率检测实验结果显示,对于红景天苷和氮氧自由基的结构衍生物CSP-NPS,相比于红景天苷原型,其细胞毒性升高。对于白藜芦醇和氮氧自由基的结构衍生物CSP-NPR-1(一取代),CSP-NPR-2(二取代),CSP-NPR-3(三取代),相比于白藜芦醇原型,结构衍生物的细胞毒性显著降低,结构改造有效的降低了单体的细胞毒性。(3)胞内ROS水平检测结果显示,经过6 Gy的X射线辐射的Jurkat T细胞胞内ROS水平相比未经处理的细胞明显升高。辐射前经浓度为100、10、1μM的结构衍生物预处理的Jurkat T细胞,辐射后24 h的检测结果显示白藜芦醇和氮氧自由基原型只能在中高浓度才具有降低胞内ROS的活性。而红景天苷原型无法降低胞内ROS水平,其与氮氧自由基的结构衍生物对胞内ROS水平作用亦不明显。白藜芦醇和氮氧自由基的结构衍生物可以显著降低辐射诱导的胞内ROS升高水平,相比于浓度为100μM的阳性药氨磷汀,CSP-NPR-1,CSP-NPR-2,CSP-NPR-3降低ROS的效果更佳。(4)细胞周期检测结果显示,经过6 Gy的X射线辐射的Jurkat T细胞,出现显著的细胞周期G2期阻滞。两个系列的结构衍生物预处理细胞均不能逆转由辐射诱导的细胞周期阻滞。(5)细胞凋亡检测结果显示,使用浓度为10μM的不同结构衍生物预处理1 h后经6 Gy X射线辐射的Jurkat T细胞,白藜芦醇和氮氧自由基结构衍生物可以显著缓解由辐射诱导的细胞凋亡(对照组VS实验组(CSP-NPR-3):20.7%VS7.28%),相比于白藜芦醇原型和阳性药氨磷汀(100μM),效果更为显著。(6)Western blot实验结果显示,用浓度为10μM的白藜芦醇和氮氧自由基结构衍生物预处理后经辐射的细胞,结构衍生物可以升高凋亡抑制蛋白(cIAP-1)的表达,升高凋亡下游蛋白全长Caspase-9的表达,降低Caspase-9的活化,同时减少线粒体内细胞色素-c释放到细胞质。(7)线粒体膜电位检测结果显示,用浓度为10μM的结构衍生物预处理后经辐射的细胞,结构衍生物对辐射诱导的线粒体膜电位的降低没有升高作用。结论:综合评价白藜芦醇、红景天苷和氮氧自由基进行结构改造形成的系列衍生物的抗辐射保护效应,发现经结构修饰后的白藜芦醇和氮氧自由基结构衍生物相比于白藜芦醇原型,具有更低的细胞毒性,其中化合物CSP-NPR-2和CSPNPR-3可显著降低辐射诱导的Jurkat T细胞胞内ROS水平的升高,并能够显著缓解辐射诱导的细胞凋亡。进一步探索,发现其作用机制是通过调节凋亡相关蛋白Caspase-9,cIAP-1和线粒体内细胞色素c的表达来发挥辐射保护效应。综上白藜芦醇系列化合物显示有较好的研究前景,可进一步开展白藜芦醇系列化合物的体内药代动力学研究和药效学评价。