hTFPI重组蛋白表达条件的优化

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yzqp178
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在多种疾病进程中,包括癌症、心脑血管疾病和炎症等,由组织因子(tissue factor,TF)引发的外源性凝血系统的激活扮演重要角色,一些患者因此致死。组织因子途径抑制因子(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)是抑制外源凝血的一种重要蛋白因子。大量临床实验和动物实验证明,重组人组织因子途径抑制因子(human recombinant tissue factor pathway inhibitor,rhTFPI)对血栓形成、感染性休克、血管再狭窄、内毒素血症和DIC等具有明显防治作用,在临床上有广泛的应用前景。目前,用多种表达系统表达rhTFPI的效果很不理想,存在的主要问题是表达量较低,以哺乳动物细胞表达系统的表达量最高(约2-5mg/L),但成本也最高。我们应用巴斯德毕赤酵母表达系统进行了rhTFPI的表达。通过优化表达条件,使摇瓶培养下的rhTFPI的表达量达到了1.6mg/L;应用发酵罐进行高密度培养后,表达量比摇瓶培养方式提高了近2倍,达到了4.6mg/L。随后,我们建立了相应的纯化方法,应用了硫酸铵分级沉淀,阴离子交换层析和凝胶过滤层析,纯化收率为43.1±0.38%,蛋白纯度大于95%。实验结果显示,利用巴斯德毕赤酵母表达rhTFPI与其他表达系统相比具有以下优势:与哺乳动物细胞表达系统相比具有成本优势,无论是细胞培养成本和还是蛋白纯化成本,前者都比后者明显低廉;与大肠杆菌表达体系相比,具有表达量高,纯化简单,且重组蛋白翻译后修饰更接近于天然的TFPI。
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