绿竹及拟南芥SEP3蛋白原核表达、纯化及寡聚体分析

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:soj
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
竹类资源丰富,研究和开发利用的空间巨大。有关竹子开花生理过程的研究一定程度上受取样困难和相关基因组信息缺乏的限制,因此研究竹子开花中的关键因子是非常必要的。植物体内SEPALLATA3蛋白(简称SEP3)与其他蛋白或元件组装成多聚体复合物,SEP3蛋白自身或与其它蛋白是如何组装的,形成什么样的空间复合物尚不清楚,但其在植物开花生长中具有非常重要的作用。本实验构建了绿竹和拟南芥SEP3蛋白的原核表达载体,纯化可溶性SEP3蛋白并进行体外功能结构试验,探究SEP3蛋白结构与功能关系及多聚体的形成机制。主要结果如下:1.成功构建得到不同结构域的原核表达SEP3蛋白载体,以pET15b为表达载体,Rosetta为宿主表达细菌,20℃条件下1%IPTG诱导15h,纯化得到了高纯度的拟南芥和绿竹的M domain SEP3蛋白、IK domain SEP3蛋白和SEP3包涵体蛋白。2.通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱MALDI TOF MS指纹图谱分析,Mascot程序将得到的多肽片段与SwissProt数据库信息比对,验证原核表达蛋白为SEP3蛋白。3.SEP3蛋白N端具有与DNA特异性结合的M区,本实验将纯化得到的M domain SEP3蛋白与启动子特异序列CArG box DNA结合,通过凝胶阻滞实验验证了SEP3蛋白具有结合DNA的活性。4.分析凝胶过滤层析峰图显示绿竹和拟南芥SEP3蛋白具有多聚性,体外戊二醛交联和酵母双杂交试验表明SEP3蛋白以二聚体为基本作用元件存在,SEP3蛋白均一性不高,主要以26聚体存在,并且同源或异源互作与K结构域具有密切关系。拟南芥和绿竹分别属于双子叶植物和单子叶植物,AtSEP3和BoSEP3不仅序列高度同源,且蛋白结构也具有很高的一致性,本研究对于植物成花机制研究具有参考意义。
其他文献
为了推进党建工作进一步有效开展,高校通过创建样板党支部提升教师党支部的战斗力,让党支部充分发挥其作用.因此,高校积极采取相应的举措打造样板党支部,而且已初见成效,不仅
为了解外科护理在线教学的效果通过问卷调查,分析评估学生在线学习存在的问题,以不断提升在线教学质量,并为今后的教学积累经验.
互联网5G时代已经到来,微博、抖音等新媒体发展越来越壮大,高校也需顺应时代变化,转变发展观念,充分利用网络新媒体平台,开展“以学生为中心”的学风建设,重点阐述网络新媒体
海外留学人才回国创业就业已经成为近年来的一大趋势.对于高学历、高水平的归国人才,应该为他们提供良好的就业与创业服务,构建优良的环境,使其成为经济发展中的新鲜血液.基
随着事业单位分类改革的不断深入,对人力资源的要求更高,员工成为事业单位的核心资源,为事业单位发展提供人才支撑.因而,需要不断强化员工培训工作,促进员工综合能力不断提升
我国人口老龄化问题日益严重,“时间银行”作为一种新型的互助养老模式,在大学生中推广有利于缓解我国的养老问题.本文以安徽财经大学为例,调查大学生群体对“时间银行”养老
日月如梭,耀邦一晃就离开我们二十年了。我还记得大约是1964年,胡耀邦作为共青团第一书记在团第九次代表大会上作了一个《为我国青年革命化而斗争》的长篇报告。当时所有渴望
5G时代颠覆了传统的外语教学,对高职教师的自主能力提出新要求.要培养具有职业素养的新时代外语人才,高职外语教师专业素养和自主能力的发展成为必须.文章梳理了教师自主发展
法治化营商环境建设是实现高质量发展的必然途径.针对陕西省目前面临的政府、市场与企业之间的关系构建问题;民营企业法治意识薄弱;制度政策及法律法规不健全等问题,要通过切
当前研究以重庆科技学院为例,系统对基于Mini-MOOC的O2O模式应用于大学体育教学实践的可行性分析进行了分析.研究认为,基于Mini-MOOC的O2O模式应用于大学体育教学是时代发展