瘦素对体外培养软骨细胞分泌NO和MMP-13的影响

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目的:通过瘦素对体外培养兔关节软骨细胞的干预,检测瘦素对兔关节软骨细胞分泌NO和MMP-13的影响,探讨其在OA发病过程中的可能机制,为防治骨关节炎、保护软骨细胞的功能提供一定的理论和实验依据。方法:为检测瘦素干预软骨细胞后对其NO分泌的影响,引入经典的炎性细胞因子TNF-α,以其刺激软骨细胞后,软骨细胞分泌NO浓度为参照,对比瘦素单独或与TNF-α联合干预后软骨细胞分泌NO的浓度。设空白对照组、TNF-α组、不同浓度瘦素组单独或与TNF-α联合,共10组。获取2月龄兔原代软骨细胞,并进行培养和免疫细胞化学鉴定。将第3代软骨细胞饥饿12小时(无血清培养),将各组与软骨细胞共同孵育48小时,提取细胞上清液,硝酸还原酶法测定其NO的浓度。对各组NO浓度进行方差分析。检测瘦素干预软骨细胞后对其MMP-13分泌的影响,设瘦素10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和空白对照组。将不同浓度瘦素与饥饿12小时后的第3代软骨细胞共同孵育48小时和96小时,ELISA(双抗夹心法)测定细胞上清液中MMP-13的浓度。对各组MMP-13的浓度进行析因分析。结果:空白组NO浓度为5.95±0.51μmol/L,不同浓度瘦素组NO浓度与空白组差别无统计学意义(P>0.05)TNF-α10ng/ml组NO浓度为10.71±0.89μmol/L,与空白组差别有统计学意义(P<0.05)。将TNF-α10ng/ml加入不同浓度的瘦素组后,测得NO浓度与空白组及TNF-α组差别有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖性升高,瘦素浓度在10~15μg/ml时,其量效关系达到最佳。空白对照组并未测出MMP-13的存在,瘦素10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml不同浓度组测得MMP-13浓度在剂量主效应和时间主效应均有统计学意义(P<0.05)。结论:瘦素在体外能协同TNF-α促进兔关节软骨细胞分泌NO、能促进软骨细胞分泌MMP-13。
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