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目的: HIV感染人体后，免疫系统针对病毒产生细胞毒等多种抗病毒免疫应答，感染者可以短暂的控制病毒血症，但是病毒仍然在复制，病毒血症难以被完全控制。T细胞是适应性免疫应答的组成部分，在对抗HIV中具有重要作用，但是大多数HIV慢性感染者T细胞出现功能耗竭和无能，而导致T细胞功能损伤的原因尚未完全阐明。 髓系抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cell，MDSC)，是一群异源群体细胞，由骨髓祖细胞和未成熟的骨髓细胞(IMCs)组成。大量研究显示MDSC具有免疫抑制作用，这种抑制性作用与精氨酸酶（Arg-1）、一氧化氮合酶(iNOS)、活性氧(ROS)、过氧硝酸盐有关。负性因子是免疫耗竭的标志，在高度活化和功能耗竭的T淋巴细胞上大量表达，对免疫活化有抑制作用。PD-1、Tim-3是两种比较重要的负性因子，PD-1与其配体PD-L1结合后能够负性调节T细胞的功能，抑制T细胞增殖，下调效应因子IL-2、IFN-γ的产生;Tim-3与配体Gal-9的结合可以抑制CD4+T细胞分泌细胞因子，如IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17等。在小鼠卵巢癌模型的研究显示，MDSC高表达PD-L1和CD80，阻断PD-L1和CD80后能够抑制MDSC的功能，而PD-L1和CD80的这种抑制性作用是通过与Treg表面的PD-1和CTLA-4相互作用实现的。以往研究证实Tim-3通过直接诱导细胞凋亡和耗竭来抑制免疫应答，但是近期的一些研究中发现T细胞上Tim-3的表达还能够通过扩增MDSC间接性的抑制免疫应答，而Tim-3的这种作用与MDSC表面Tim-3的配体Gal-9有关。 在HIV感染中关于MDSC的研究仅限两篇，关于MDSC的研究表型不一致，研究的人群也局限于慢性感染者，在HIV感染早期，MDSC的数量可能会决定疾病预后，对于HIV感染早期MDSC表达情况以及与疾病进展的关系还未见报道，这群MDSC表面负性因子配体PD-L1和Gal-9的表达情况如何尚无报道。 本研究拟对不同感染阶段HIV感染者MDSC进行研究，明确急性期HIV感染者MDSC的表达变化以及与疾病进展的关系，并研究HIV感染者MDSC表面PD-L1和Gal-9表达情况，探索MDSC抑制作用与PD-L1和Gal-9的关系。 方法: 1、研究对象 32例无症状HIV慢性感染者(CHI)、15例无症状HIV急性期感染者(PHI)均来自中国医科大学附属第一医院红丝带门诊，感染途径多为男男性接触，CHI患者感染时间一年以上，PHI患者感染时间180天以内，在检测时间点均未接受HAART治疗;10例健康对照为随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人(NC);8例肿瘤未治疗患者。HIV及NC组年龄、性别经检验均无显著性差异。 2、MDSC表型检测 实验对象每人抽取1.5ml全血，提取PBMC。提取的PBMC用PBS洗一遍后进行表面染色。MDSC:CD14PE-Cy-7、CD11bAPC、HLA-DRAPC-Cy-7、CD33FITC;活化:CD3PE-Cy-7、CD4APC-Cy-7、CD8Percp、CD38FITC、HLA-DRAPC;负性因子:CD3PE-Cy-7、CD4APC-Cy-7、CD8Percp、PD-1FITC、Tim-3PE。室温避光染色20min。染色后用PBS洗一遍，上样前每管补多聚甲醛150ul。流式检测CD14-/+HLA-DR-/lowCD33+CD11b+细胞。 3、MDSC抑制功能检测 30ml全血提取急性期HIV感染者PBMC，20ml全血提取健康人PBMC，活细胞计数。磁珠负选健康人CD8+T细胞，染CFSE，流式分选HIV感染者MDSC（表面染色CD14、CD11b、CD33、HLA-DR），分选后的MDSC与健康人CD8+T细胞以2:1比例孵育3天，进行CD8+T细胞增殖检测。孵育后的细胞取出后用PBS洗一遍，进行表面染色(CD8)，4度避光染色30min。染色后用PBS洗一遍，上样前每管补多聚甲醛150ul。流式检测CD8+T细胞的增殖情况。 4、MDSC表面PD-L1、Gal-9检测 实验对象每人抽取1.5ml全血，提取PBMC。提取的PBMC用PBS洗一遍，按流式管数目补PBS，然后每管加入100ul细胞悬液进行表面染色，CD14PE-Cy-7、CD11bAPC、HLA-DRAPC-Cy-7、CD33FITC，PD-L1PE、Gal-9PE，室温避光染色20min。染色后用PBS洗一遍，上样前每管补多聚甲醛150ul。流式检测HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh上PD-L1和Gal-9的表达量。 5、CD4+T细胞绝对值及病毒载量检测 CD4+T细胞绝对值依据1997年美国CDC关于HIV感染者CD4+T细胞检测指导方法，应用BD公司TruCOUNT管、FACSCalibur流式细胞仪MULTISET软件检测。病毒载量采用Roche公司COBAS(@)AmpliPrep(@)/COBAS(@)TaqMan(@)System自动载量仪上以实时荧光定量PCR方法测定病毒载量。 6、统计学分析 应用SPSS17.0软件包进行统计分析，数据以MeanwithSEM表示，两组间实验指标的比较采用Mann-WhitneyU检验两组间的差异性，相关性分析采用Spearman秩相关检验，相关的两组之间的比较用两配对样本检验(Wilcoxon)，P＜0.05为有统计学意义。 实验结果: 一、HIV急性期感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表达增加 我们首先对髓系抑制性细胞的表型进行研究，以CD14-和CD14+来区分单核细胞MDSC和粒细胞MDSC，结果发现HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11b+有两群细胞:HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11blow和HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh。HIV急性期感染者(p=0.03)、慢性感染者(p=0.02)和肿瘤患者(p=0.0008)的HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数均高于健康人(NC)，肿瘤患者高于急性期(p=0.003)和慢性期HIV感染者(p=0.01)，而HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11blow和HLA-DR-/lowCD14+CD33+CD11b在四组中无显著性差异。 二、HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞能抑制CD8+T细胞增殖并且与疾病进展有关 为了验证HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞是否是具有抑制功能，我们进行了体外实验，发现这群细胞能够抑制CD8+T细胞增殖。我们进一步分析髓系抑制性细胞与疾病进展的关系，发现总的HIV感染者（急性期和慢性期）HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与CD4+T细胞的数量呈负相关(r=-0.4，p=0.005)，与载量呈正相关(r=-0.67，p＜0.0001)，与CD4+T细胞的活化水平（％CD4+CD38+HLA-DR+）呈正相关(r=0.48，p=0.01)，与CD8+T细胞的活化水平无相关性;慢性期感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与CD4+T细胞的数量呈负相关(r=-0.41，p=0.02)，按CD4+T细胞大于和小于350cells/ul进行分组，发现CD4+T细胞大于350细胞/微升组HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数有低于CD4+T细胞小于350细胞/微升组的趋势(p=0.18)，而HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与载量呈正相关(r=0.7，p＜0.0001)，与CD4+T细胞的活化水平(％CD4+CD38+HLA-DR+)呈正相关(r=0.65，p=0.002)，与CD8+T细胞的活化水平无相关性;急性期HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与CD4+T细胞的数量呈负相关(r=-0.72，p=0.0026)，按CD4+T细胞大于和小于500细胞/微升进行分组，发现CD4+T细胞大于细胞/微升组HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数低于CD4+T细胞小于500细胞/微升组(p=0.0054)，并且HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与载量呈正相关(r=0.62，p=0.01)，与CD4+T细胞的活化水平(％CD4+CD38+HLA-DR+)呈正相关(r=0.64，p=0.034)，与CD8+T细胞的活化水平(％CD8+CD38+HLA-DR+)有正相关的趋势，但无统计学意义。 三、HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面PD-L1和Gal-9表达增加 急性期HIV感染者(p=0.02)、慢性期HIV感染者(p＜0.0001)和肿瘤患者(p=0.0016)HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面PD-L1百分数高于健康人;慢性期HIV感染者(p=0.03)、肿瘤患者(p=0.026)HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面Gal-9百分数高于健康人;总的HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面PD-L1百分数(r=-0.42，p=0.01)和Gal-9百分数(r=-0.4，p=0.007)与CD4数量呈负相关，与病毒载量有正相关的趋势。慢性期HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面PD-L1百分数(r=-0.44，p=0.037)和Gal-9百分数(r=-0.38，p=0.03)与CD4+T细胞数量呈负相关，与病毒载量有正相关的趋势。急性期HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面PD-L1和Gal-9百分数与CD4数量和病毒载量均无相关性。 四、慢性期HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表达量与CD4+T细胞表面TIM-3、PD-1表达有关 慢性期HIV感染者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞百分数与CD4+T细胞表面PD-1(r=0.52，p=0.02)和TIM-3(r=0.54，p=0.014)百分数呈正相关，与CD8+T细胞表面TIM-3和PD-1的百分数无关。 结论: HIV急性期患者HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表达增加，体外实验证明这群细胞具有抑制CD8+T细胞增殖的作用，与疾病进展具有密切的相关性;HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhigh细胞表面负性因子配体PD-L1和Gal-9表达高于健康人，与疾病进展密切相关，HLA-DR-/lowCD14-CD33+CD11bhi曲细胞表达量与CD4+T细胞表面负性因子PD-1和Tim-3有关。