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桅子豉汤由栀子和淡豆豉两味药组分。本文以桅子豉汤为研究对象,研究其化学成分、入血成分、质量控制方法、活性物质的体内药代动力学以及对抑郁模型大鼠的改善作用。为该复方的现代临床应用和开发提供依据。研究内容如下:1.采用现代分离纯化技术,对栀子豉汤中栀子Gardeniajasminoides Ellis的干燥果实栀子和大豆Glycine max (L.) Merr.的发酵品淡豆豉的化学成分进行了研究。利用快速柱色谱(硅胶/ODS)、半制备型HPLC从栀子果实75 %乙醇提取物的正丁醇萃取层中,淡豆豉的乙酸乙酯层共分离得到14个化合物。通过理化性质和波谱分析鉴定了它们的结构,其中10个从栀子中分离得到,分别为:7个环烯醚萜类成分,2个栀子黄色素类成分,1个为单萜苷类成分;4个从淡豆豉中分离得到,均为大豆异黄酮类成分。它们分别为:栀子苷(geniposide,1),轻异栀子苷(gardenoside, 2),去乙酰车叶草苷酸甲酯(deacetyl asperulosidic acid methy1 ester,3),鸡矢藤次苷甲酷(scandoside methy1 ester,4),,6-甲氧基鸡屎藤次苷甲酯(6-methoxy1-scandoside methy1 ester, 5),jasminoside B (6),京尼平-1-β-龙胆苷(genipin-1-β-gentiobioside,7),6"-O-[(E)- pcoumaroy1]gentio biosy1 genipin(8),西红花苷-1(crocin-1,9),西红花苷-3(crocin-3,10),染料木素(genistein,11),大豆素(daidzein,12 ),染料木苷(genistin, 13),大豆苷(daidzin,14),分离得到的14个化合物都为两味药材的主要成分,为该中药化学成分的分析和质量控制提供了保证,也为体内药代动力学研究奠定了物质基础。2.本实验将传统的沉淀蛋白样品处理方法与现代高效液相-串联质谱联用技术(HPLC-MS/MS)相结合,对栀子豉汤中的主要化学成分进行鉴定,并归属其药材来源。共发现47个色谱峰,并鉴定了它们的结构,其中41个化合物来自于栀子,6个化合物来自于淡豆豉。结果表明栀子豉汤中的大多数成分来源于栀子,从化学成分角度验证了栀子在药对中占主要部分。47个化合物分别为20个环烯醚萜类化合物、8个单萜苷类化合物、7个有机酸类化合物、4个栀子黄色素类化合物和8个黄酮类化合物。阐明了栀子豉汤主要的化学物质基础,为其药效学和质量控制方法的深入研究奠定基础。本研究根据中药血清药物化学的研究思路,对栀子豉汤的体外和体内样品进行分析,发现大鼠口服栀子豉汤后的24个入血成分并推测了它们的结构。其中包括19个栀子豉汤中的原型成分和5个代谢产物。原型成分分别为栀子酸、鸡矢藤次苷甲酯、羟异栀子苷、去乙酰车叶草苷酸甲酷、Jasminoside B,栀子苷,山栀子苷,Jasminoside D,ixoroside, picrocrocinic acid, Jasminoside A, Jasminoside E, Jasminoside K, Jasminoside C,10-乙酰基栀子苷,大豆素和染料木素;5个代谢产物分别为:芥子酰基葡萄糖醛酸、京尼平葡萄糖醛酸、染料木素葡萄糖醛酸、大豆素葡萄糖醛酸和芥子酸。结果表明,栀子豉汤入血的成分主要为栀子中的环烯醚萜类、单萜苷类以及淡豆豉中的异黄酮类成分。3、采用HPLC-MS法,建立了 16个成分同时含量测定方法,并测定栀子-淡豆豉不同比例配伍后(4:0, 2:1,1:1,1:2, 0:4),环烯醚萜类、栀子黄色素类、单萜苷类和异黄酮类成分的含量变化。采用Diamonsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.2 %甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,进样量为5 μL;离子源为电喷雾电离源(ESI源);CDL温度250℃;加热块温度200℃;雾化气(N2)流速1.5L·min-1;检测电压1.75kv;正离子方式检测;扫描方式为选择离子检测(SIM)。结果表明:16个成分在考察的范围内与峰面积呈良好的线性关系(r >0.9980),各成分的日内和日间精密度的RSD值分别在1.2～2.7%和1.3～2.8%范围内,方法回收率(n = 9)在99.3～103.7%之间,且RSD均小于2.6%。测定结果表明不同比例配伍对不同化合物的溶出量影响不同:与单煎液相比,合煎液中羟异栀子苷(2),去乙酰车叶草苷酸甲酯(3),栀子酸(5),西红花苷-3 (9)这4个化合物溶出量低于单煎液;jasminoside B (8),在合煎液单煎液中溶出量没有变化;栀子苷(1),6"-O-[(E)- pcoumaroyl]gentio biosyl genipin (7),染料木昔(15)这3个化合物在栀子-淡豆豉1:1配伍时溶出量最高;鸡矢藤次苷甲酯(4),京尼平-1-β-龙胆苷(6),绿原酸(10),异槲皮苷(11),芦丁(12),染料木素(13),大豆素(14),大豆苷(16)这8个化合物在栀子-淡豆豉2:1配伍时溶出量最高。4.首次建立了同时测定大鼠血浆中栀子苷、鸡矢藤次苷甲酯和京尼平-1-β-龙胆苷高效液相-质谱(HPLC-MS)方法。以红景天苷为内标,血浆经加入0.05%甲酸和乙腈沉淀蛋白后,取上清液,氮气流下吹干,流动相复溶后进样分析。栀子苷在2～2000ng·mL-1,鸡矢藤次苷甲酯、京尼平-1-β-龙胆苷均在2～250ng·mL-1范围内线性关系良好,定量下限均为2 ng·mL-1,待测物和内标的提取回收率均大于80.4%,方法的专属性、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。采用所建立的方法测定了大鼠灌胃分别给予栀子豉汤和栀子水煎液后栀子苷、鸡矢藤次苷甲酯和京尼平-1-β-龙胆苷的血药浓度,考察了栀子苷、鸡矢藤次苷甲酯和京尼平-1-β-龙胆苷在大鼠体内的药动学行为,大鼠灌胃给予栀子豉汤和栀子水提液后,栀子苷的峰浓度Cmax分别为1484 ± 241, 1441±239 ng·mL-1,曲线下面积AUC0-∞分别为7284± 1186, 6397 ± 2218 ng·h·mL-1,半衰期T1/2分别为6.4 ±2.3, 7.0 ±5.6 h,达峰时间Tmax分别为0.75 ±0.27, 1.41 ± 1.24 h;鸡矢藤次苷甲酯的峰浓度Cmax分别为131.3 ± 26.3, 116.3 ± 23.2 ng·mL-1,曲线下面积AUC 0-∞分别为978 ± 251,772.8 ± 206.6 ng·h·mL-1,半衰期T1/2分别为5.2 ± 0.9, 5.4 ± 0.3 h,达峰时间Tmax分别为2.8 ± 0.8, 3.2 ± 0.4 h;京尼平-1-β-龙胆苷峰浓度Cmax分别为216.5 ± 61.6, 171.4 ±63.1 ng·mL-1,曲线下面积 AUC0-∞ 分别为 1105±369,621.1 ±183.4 ng·h·mL-1,半衰期T1/2分别为4.8 ±0.4, 3.4 ±2.2 h,达峰时间Tmax分别为1.0 ±0.3, 1.0 ±0.5 h。结果表明,大鼠灌胃栀子豉汤合煎液后,栀子苷、鸡矢藤次苷甲酯、京尼平-1-β-龙胆苷的AUC(0-∞)值明显高于灌胃栀子单煎液,这说明配伍淡豆豉后,淡豆豉中的化学成分有助于这3种环烯醚萜的体内吸收。因此,本研究从有效成分体内药动学行为方面证明了栀子豉汤配伍使用的合理性。5.考察了桅子豉汤对抑郁模型大鼠的改善作用。设正常对照组、抑郁模型组、栀子豉汤组和阳性对照组(盐酸氟西汀),采用孤养和多种长期慢性轻度不可预知的应激,连续造模35天致大鼠抑郁模型。连续治疗21天,定期测定各组大鼠体重、糖水消耗量、大鼠大脑皮质中5-HT,5-HIAA,DOPAC,DA以及大鼠血浆中5-HT,5-HIAA中的含量。结果表明:给药前,与正常对照组比较,模型组和给药组大鼠体重增长缓慢,糖水消耗量也减少,且大脑皮质以及血浆中5-HT,5-HIAA含量减少,连续治疗21天后,给药组的大鼠体重,糖水消耗量,大脑皮质以及血浆中5-HT,5-HIAA含量与模型组相比,有显著性差异(P<0.05),说明栀子豉汤具有良好的改善抑郁模型大鼠的抑郁症状的作用,具有良好的开发价值和应用前景。