【摘 要】
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CRISPR/Cas9基因编辑系统能够通过病毒和非病毒的递送方式精准治疗新生耳聋小鼠的听力损失。腺相关病毒（AAV）介导的基因递送系统已被证明是内耳基因替代治疗的有效工具。然而,将AAV介导的CRISPR/Cas9编辑系统应用于成年小鼠内耳治疗尚无报道。我们通过后半规管注射的方法研究了4种不同血清型AAV在成年小鼠内耳的转染特性,发现AAV8转染内毛细胞（IHC）的效率和特异性最高。然后,我们测试
【基金项目】
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国家自然基金重点项目（81330023）；
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CRISPR/Cas9基因编辑系统能够通过病毒和非病毒的递送方式精准治疗新生耳聋小鼠的听力损失。腺相关病毒（AAV）介导的基因递送系统已被证明是内耳基因替代治疗的有效工具。然而,将AAV介导的CRISPR/Cas9编辑系统应用于成年小鼠内耳治疗尚无报道。我们通过后半规管注射的方法研究了4种不同血清型AAV在成年小鼠内耳的转染特性,发现AAV8转染内毛细胞（IHC）的效率和特异性最高。然后,我们测试了表达Cre的AAV8激活成年Cas9敲入（Cas9 KI）小鼠的Cas9表达的能力。我们共比较了六种不同启动子（CMV,CAG,h Syn,Ca MKIIa,GFAP,ALB）的AAV8在成年Cas9 KI小鼠内耳中的转染特性,发现三种AAVs（CMV,CAG,h Syn）能有效感染内耳中的多种细胞类型（包括IHCs）,且具有不同的感染倾向。耳蜗铺片免疫荧光染色分析表明,AAV8-CAG和AAV8-CMV能感染几乎所有IHCs、部分螺旋神经元（SGNs）和螺旋边缘纹区域细胞;而AAV8-h Syn显示出对IHCs和SGNs的高度亲和力。AAV8病毒本身（AAV8-CAG除外）及外科手术均不会损害HCs或正常听力。我们的研究表明,内耳注射AAV8-Cre可以诱导Cas9激活,实现成年小鼠内耳安全有效的基因编辑。携带不同启动子的AAV8在耳蜗中表现出不同的感染方式,靶向不同的内耳细胞类型,从而为挽救遗传性听力损失或开发新的基因治疗产品提供良好的工具。
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