目的雷公藤多苷属于中药雷公藤的脂溶性化合物之一,用于多种免疫性疾病的治疗,尤其是狼疮性肾炎（Lupus Nephritis,LN）。本实验使用串联质谱6-plex（Tandem Mass Tag 6-plex,TMT6-plex）标记联合液相色谱串联质谱技术,测定雷公藤多苷治疗前后的LN患者血清蛋白质表达,发现显著性差异蛋白质,并探索差异蛋白质的生物功能及相关信号转导途径。揭示显著性差异蛋白质与雷公藤多苷治疗LN之间的潜在联系,进而为后续LN的治疗及监测提供新的思路或依据。方法纳入2020年1月至2020年10月在内蒙中医院风湿免疫科病房及门诊中使用雷公藤多苷片治疗,且治疗有效的LN患者,共12例,所有LN患者均符合实验的纳入及排除标准。临床收集雷公藤多苷治疗前后的LN患者血清标本,分为:（1）雷公藤多苷治疗前LN患者血清（LN-F）组,（2）雷公藤多苷治疗后LN患者血清（LN-L）组。同时,本实验为便于TMT6-plex（126-131）标记肽段,每组血清按比例平均分为3个样品组,共6个样品组。首先,利用赛默飞公司的试剂盒High Select（?）Top14 Abundant Protein Depletion Resin处理各个样品组血清标本中的高丰度蛋白质,结合考马斯亮蓝染色与电泳技术观察去除效果,留取低丰度蛋白质进行超滤管酶解以获得肽段,进行肽段脱盐。其次,运用TMT6-plex试剂标记肽段,将6个样品组中标记后的肽段合并到一起,开始液相色谱串联质谱分析,构建差异蛋白质的表达谱。进一步对显著性差异蛋白质进行GO分类、信号转导途径富集分析以及差异蛋白质相互作用分析。最后,以蛋白质免疫印迹实验（Western Blot,WB）来验证部分显著性差异蛋白质的表达,如整合素B3（Integrin Beta-3,ITGB3）与膜突蛋白（Moesin,MSN）。结果1.本实验结合考马斯亮蓝染色与电泳技术观察高丰度蛋白质的处理效果,与LN-F组及LN-L组中各样品组原血清相比,经处理后的各个样品组血清中蛋白质丰度明显降低。2.使用TMT6-plex标记与液相色谱串联质谱技术进行分析,并满足上、下调差异表达倍数（∣log2 Fold change∣）＞1且P＜0.05等筛查条件,结果得到了31个显著性差异蛋白质。3.差异蛋白质在GO分类中,共富集了2405条GO生物功能途经,其中238条于细胞组分,1929条于生物学过程,其余238条于分子功能。4.经信号转导途径富集分析显示,差异蛋白质富集了109条途径。依据富集的差异蛋白数目进行排序,细胞吞噬、调节肌动蛋白细胞骨架、细胞凋亡、结核、蛋白多糖分泌、收集管酸分泌、半乳糖代谢、糖尿病分型、谷胱甘肽代谢以及花生四烯酸代谢等途径为前10条途径,其中差异蛋白在细胞凋亡、细胞吞噬与调节肌动蛋白细胞骨架等途径的富集最高。并且,对前10条途径及其差异蛋白进行相互作用分析,发现有6个下调差异蛋白与4个上调差异蛋白的富集或相互作用,ITGB3与MSN作为连接度较高的蛋白质,通过与其它差异蛋白相互作用,调节多种途径。5.Western Blot实验验证ITGB3与MSN差异蛋白质的表达,结果显示,经雷公藤多苷治疗后的LN患者血清中ITGB3与MSN差异蛋白表达均下调,与TMT6-plex分析结果一致。结论1.雷公藤多苷可能通过影响差异蛋白质表达,如下调ITGB3与MSN等差异蛋白而缓解LN患者病情发展。2.GO分类结果表明,雷公藤多苷缓解LN进展的作用机制可能与蛋白结合靶点的识别,调节蛋白质及阳离子复杂性结合有关。3.信号转导途径富集与差异蛋白质相互作用分析表明,调节肌动蛋白细胞骨架、细胞吞噬及细胞凋亡等途径可能是雷公藤多苷治疗LN的关键途径。4.雷公藤多苷治疗LN涉及多靶点、多环节与多途径的共同作用。