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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemicdiarrhea virus,PEDV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病,猪流行性腹泻病在各地区广泛流行,造成了很大的经济损失。猪流行性腹泻病毒的研究成为现今研究的热点之一。猪流行性腹泻主要以严重的呕吐、脱水和腹泻为特征,尤其对仔猪致病性最强。猪流行性腹泻病毒S蛋白是重要的表面结构蛋白,含有主要的抗原决定簇和受体结合域,且具有较好的免疫原性。本研究对猪流行性腹泻病毒S蛋白的免疫优势区和受体结合域进行鉴定与生物淘选,为猪流行性腹泻病毒诊断方法和新型疫苗的开发及抗病毒机制研究提供信息。本研究成功将扩增的猪流行性腹泻病毒rS1基因克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-rS1,经IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。以重组蛋白作为免疫原制备兔抗rS1抗体并进行效价测定及生物活性检测。结果证实多抗效价达1:65536,间接ELISA和Western-Blot实验证实此多抗可与rS1蛋白发生很好的抗原抗体反应,说明该多抗能够用于rS1蛋白特异性检测。进一步的研究以猪流行性腹泻病毒rS1重组蛋白为靶分子,通过噬菌体生物淘选,对其进行了五轮噬菌体筛选。第四轮对表达载体pGEX-6P-1的标签蛋白GST进行筛选,对第五轮洗脱物随机淘选到的10个噬菌体进行序列测定,最终共得到五种噬菌体序列,其中6个噬菌体展示一致序列-SSTPSGHWHVSW-。Phage-ELISA结果显示,五种噬菌体均具有良好的敏感性及特异性。通过间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测人工合成的多肽体外抗病毒活性,结果显示猪流行性腹泻病毒与多肽共同孵育1h后再加入Vero-E6细胞该作用方式有抑制病毒的作用。本研究为寻找猪流行性腹泻病毒受体提供了一定的理论基础,对新型多肽疫苗的开发具有参考价值。