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研究背景:胶质瘤（Glioma）是一种颅内原发恶性肿瘤,肿瘤常与周围组织分界不清,侵袭性强,导致胶质瘤患者面临易复发、耐药性增多和预后差等问题。目前标准的治疗方案是手术切除与术后放、化疗等辅助治疗方法相结合的综合治疗。尽管如此,胶质瘤患者的中位生存期仅为14.6个月。胶质瘤的治疗效果不佳多与胶质瘤的高侵袭性有关。上皮-间质转化（EMT）参与多个肿瘤的迁移和侵袭过程,与肿瘤的迁移和侵袭能力密切相关。因此将胶质瘤的EMT作为治疗靶点对于提升胶质瘤的治疗效果并改善胶质瘤患者的预后意义重大。锌指蛋白可作为致癌基因或抑癌基因参与到胶质瘤发生发展的多个环节,并可影响胶质瘤患者的预后;亦有锌指蛋白家族成员参与对胶质瘤EMT调控的相关报道,但锌指蛋白263（ZNF263）是否参与影响胶质瘤EMT的相关研究较为少见。研究目的:本研究旨在观察锌指蛋白263是否可以对胶质瘤的EMT产生影响,并对其产生影响的分子机制进行探讨。研究方法:本研究应用分子生物学、细胞生物学、组织学等技术,分为体外研究和体内研究两大部分,观察ZNF263在人脑胶质瘤组织中的表达情况以及对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并进一步探索其背后的分子机制。在体外研究中,首先通过Western blot和免疫组织化学染色观察ZNF263在人脑胶质瘤组织中的表达情况,并通过在线数据库分析评估ZNF263与患者总生存期的关系。运用质粒转染的方法,分别构建ZNF263和Furin的敲减和过表达细胞系。通过CCK-8、平板克隆实验观察ZNF263对胶质瘤细胞增殖、克隆形成能力的影响;通过划痕实验、Transwell小室实验检测ZNF263对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;通过Western blot检测ZNF263对EMT相关标志物（N-钙黏蛋白、Slug、Vimentin、Twist）及TGF-β信号通路中相关信号分子（TGF-β1、p-Smad2/3）的影响;并从正、反两方面探究ZNF263对胶质瘤细胞EMT产生的影响,以阐明ZNF263对胶质瘤细胞EMT发挥作用的相关机制。此外,还通过Western blot实验检测ZNF263对Furin的调节作用以及Furin促进TGF-β1的生成和对EMT的影响。在体内研究中,构建裸鼠皮下成瘤移植模型,通过免疫组织化学染色验证ZNF263对胶质瘤EMT及Furin的调控作用,并探究Furin对胶质瘤EMT的影响。研究结果:Western blot、免疫组织化学染色、在线数据库分析预测等结果显示,相比于正常人脑组织,ZNF263在人脑胶质瘤组织中的表达明显增高,且ZNF263的表达水平与患者总生存期呈负相关（P＜0.05）;在细胞增殖能力方面,CCK-8实验结果表明胶质瘤细胞LN229和U251ZNF263 sh RNA组细胞增殖能力随ZNF263表达水平的降低而受到明显抑制（P＜0.05）;平板克隆实验结果显示LN229和U251 ZNF263 sh RNA组细胞克隆形成数目减少;裸鼠皮下成瘤移植模型显示接种ZNF263 sh RNA组的皮下成瘤重量、成瘤体积均小于NC组,且皮下成瘤的生长速度较NC组明显减慢（P＜0.05）。在细胞迁移和侵袭生物学功能方面,分别提取LN229和U251细胞的NC组和ZNF263 sh RNA组蛋白,Western blot结果显示EMT相关标志物（N-钙黏蛋白、Slug、Twist、Vimentin）的表达水平均随ZNF263的下调而降低（P＜0.05）;划痕实验和Transwell小室实验显示ZNF263 sh RNA组细胞迁移率、穿过Transwell小室细胞数目均明显低于NC组（P＜0.05）;而在A172 ZNF263过表达细胞中,Western blot检测结果显示EMT的相关标志物（N-钙黏蛋白、Slug、Twist、Vimentin）表达上调（P＜0.05）,划痕实验和Transwell小室实验也显示细胞迁移率、穿过Transwell小室细胞数目均较NC组明显增高（P＜0.05）。体内研究中,免疫组织化学染色结果也再次证实ZNF263 sh RNA组成瘤组织中Twist的表达较NC组明显降低。机制方面,在胶质瘤细胞LN229和U251中,Western blot结果显示降低ZNF263的表达可以使TGF-β1、p-Smad2/3的表达下降,而过表达ZNF263则可以使TGF-β1、p-Smad2/3表达上调;加入LY2109761（TβRI和TβRII双重抑制剂）后,过表达ZNF263对TGF-β1、p-Smad2/3的促进作用受到抑制（P＜0.05）。体内免疫组织化学染色结果也证实下调ZNF263的表达后,p-Smad2/3的表达下降。此外,Western blot结果表明LN229和U251的ZNF263 sh RNA组细胞中Furin表达下降,而在A172 ZNF263 OE组细胞中Furin表达升高（P＜0.01）;在A172和LN229 Fuirn的sh RNA组细胞中,TGF-β1、EMT标志物（N-钙黏蛋白、Slug、Twist、Vimentin）表达下降,而LN229 Furin OE组细胞中TGF-β1、EMT标志物（N-钙黏蛋白、Slug、Twist、Vimentin）表达上升（P＜0.05）;划痕实验和Transwell小室实验结果也与Western blot实验结果一致;体内实验结果也证实在ZNF263的表达下调后,Furin的表达随之下降;裸鼠接种Furin sh RNA组细胞成瘤组织中Twist表达也低于NC组。研究结论:1.ZNF263在胶质瘤中发挥致癌作用;2.降低ZNF263的表达抑制胶质瘤细胞的增殖能力;3.ZNF263通过激活TGF-β/Smad信号通路对胶质瘤的EMT发挥促进作用,进而促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。4.Furin接受ZNF263的调节,促进TGF-β1的生成,并对胶质瘤EMT发挥促进作用。