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研究背景原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种以多见于女性的慢性自身免疫性肝脏疾病,其发病机制至今仍没有完全阐明,PBC的血清标志物在PBC的诊断中具有无可替代的作用,但目前使用的PBC血清标志物并不理想,因此用新的研究手段进行PBC血清标志物的研究显得非常重要。研究方法以人类cDNA文库为模板,设计目的基因的特异引物,将PCR扩增的目的基因产物和线性化的酵母表达质粒pEGH共转染酵母Y258。利用半乳糖诱导含有目的基因的酵母克隆表达重组蛋白。通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化含GST标签目的重组蛋白点制高通量芯片。采用人类基因组编码蛋白高通量芯片筛选原发性胆汁性肝硬化血清,寻找PBC特异性血清标志物。研究结果制备的高通量蛋白芯片共计38 400个蛋白点,含17 718个人类基因编码蛋白,该芯片蛋白点的检出率为97.6%,蛋白复点间检测信号强度的相关系数为0.98。该芯片在PBC组与对照组间筛选出18个具有统计学意义(P<0.01)标志物。在最好的5个标志物中,针对PDHA1、DBT和DLAT的抗体为现在已经使用的PBC标志物AMA-M2组成部分,针对HKl和ZNF364的抗体为新发现的PBC标志物,在PBC中的阳性率分别为52.38%(11／21)和38.10%(8／21),在对照组中的阳性率均为0.00%(0／30)。AMA-M2阳性与AMA—M2阴性PBC患者间没发现具有统计学意义的血清标志物。ACA阳性与ACA阴性PBC患者间仅针对CENPB的抗体具有统计学意义(P<0.01)。研究结论人类基因组编码蛋白高通量芯片是一种快速全面筛选PBC新标志物的技术。针对HKl和ZNF364的抗体具有较好的敏感性和特异性,可以作为PBC新标志物。AMA-M2阳性与AMA-M2阴性PBC患者间没发现具有意义的血清标志物,所谓的AMA-M2阴性患者可能是由于检测方法所致的假阴性。PBC患者的ACA以B亚型为主,而针对CENPB的抗体可以作为ACA阳性与ACA阴性PBC患者间的标志物。研究目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清抗酿酒酵母细胞抗体(ASCA),探讨其在PBC中的阳性状况以及与其他PBC自身抗体的关系和临床意义。研究方法采用ELISA检测198例PBC患者、44例自身免疫性肝炎(AIH)患者、41例肝病对照组(LDC)患者、169例炎症性肠病(IBD)患者及167例其他疾病对照组患者血清ASCA的IgA和IgG亚型,分析该抗体与各种指标的相互关系。研究结果ASCA-IgA在PBC患者中的阳性率为24.2%,高于溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)组11.3%(X2=6.8,P<0.01)和其他疾病对照组组12.6%(X2=8.0,P<0.01),与AIH组(20.5%)、LDC组(14.6%)和克罗恩病(Crohn’s disease,CD)组(33.9%)比较,差异无统计学意义(P>0.05); ASCA-IgG在PBC患者中的阳性率为13.6%,明显低于CD组27.4%(X2=6.4,P<0.05)和其他疾病对照组24.6%(X2=7.1,P<0.01),与AIH组(15.9%)、LDC组(7.3%)和UC组(7.2%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)；ASCA-IgA或IgG阳性的PBC患者占29.8%,显著低于CD组45.2%(X2=5.0,P<0.05),高于UC组14.4%(X2=8.3,P<0.01)和其他肝病对照组9.8%(X2=7.0,P<0.01)。抗GP210抗体阳性的PBC患者ASCA阳性率高于抗GP210抗体阴性PBC患者(39.7%&24.6%,X2=4.9,P<0.05)；抗线粒体抗体(AMA)、抗SP100抗体阳性和阴性PBC患者间ASCA的阳性率差异无统计学意义。ASCA-IgA阳性PBC患者TBIL、DBIL、ALP、AST、TBA、LD、IgA、IgM、ESR高于ASCA-IgA阴性PBC患者,而ALB和CHE低于ASCA-IgA阴性PBC患者(P均<0.05)。ASCA-IgG阳性PBC患者与阴性患者间肝功能损伤指标和免疫功能指标均无统计学差异。研究结论ASCA并不是炎症性肠病特异性自身抗体,在PBC患者有较高的阳性率,且以IgA亚型为主。ASCA-IgA与PBC患者肝功能损伤指标和免疫活动指标改变有关,而ASCA-IgG与PBC患者肝功能损伤指标和免疫活动指标改变无关。