热加工处理转Bt水稻基因的降解及其检测研究

来源 :沈阳师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:xieyuchun
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在我国自主转Bt基因水稻快速发展的背景下,针对目前对其在加工品中的检测还没有系统研究的情况下,本研究利用外源模拟热加工的方法,选取我国目前几个成熟的转Bt基因水稻作为研究对象,研究适合含有米质品加工品的DNA提取方法,并研究转Bt基因水稻不同加工过程内、外源基因及Bt蛋白含量的降解规律,建立相应的检测技术,完善加工品转基因成份的检测规程,为转基因成份的检测和溯源提供技术支持,对于转基因生物安全监管具有重要意义。主要研究结果如下:1.DNA提取方法研究:本实验对比了5种不同方法提取转Bt基因水稻(Bt-ZJ22)及含有米质品的加工品DNA的效果。以确定适合转基因水稻及其加工品DNA的提取方法,为后续建立转基因水稻及其加工品的PCR检测方法莫定基础。结果显示CTAB法和碱处理法所提取的DNA得率较高;在纯度上5种方法相差不大;琼脂糖凝胶电泳检测5种方法提取的DNA完整性显示所有样品提取的DNA均严重降解;在以水稻内标准基因SPS进行PCR扩增时,Wizard kit法扩增效果最好,能够满足PCR定性鉴定的需要,而且提取过程简单、快速。综合考虑,Wizard kit法更适合于转基因水稻及其加工品PCR检测中DNA模板的制备。2.热加工处理对转Bt基因水稻内外源基因的影响:采用高温灭活、水煮、高温烘干和微波4种外源模拟热加工的方法处理3种转Bt基因水稻(KMD1、TT51-1和KF6),按照国家标准对水稻内标准基因SPS、调控元件CaMV35S启动子和NOS终止子、外源基因Bt进行定性PCR检测,研究目前对这三种转基因水稻的检测方法是否适合检测其在加工品中的成份。并针对转Bt基因水稻外源基因各个片断(Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ab/Cry1Ac等)利用引物设计软件Primer Premier5.0设计相应的引物,对水稻内源SPS基因和外源Bt基因进行不同大小片段的PCR扩增,了解转Bt基因水稻在模拟热加工过程中内、外源基因的降解规律,寻找外源基因在加工品中的稳定区域。研究结果表明,三种Bt基因在热处理过程中的降解情况不尽相同。热加工过程无论对内源基因和外源插入基因的检测都有影响,转基因水稻中的各种外源成分在不同加工条件下稳定性不同。本文新设计的引物可以成功的用于转基因水稻及其加工产品的检测。3.热加工处理对转Bt基因水稻蛋白含量的影响:实验中采用ELISA方法测定了不同热加工处理转Bt基因水稻种子中Bt蛋白的表达水平及蛋白含量,结果显示微波和180℃烘干处理仍能检测出Bt蛋白;高温灭活处理在TT51-1和KF6中能检测到极少量的蛋白含量,KMD1中未检出;200℃烘干和水煮处理对Bt蛋白含量影响较大,在三种
其他文献
财政专项资金是指具有专项用途,为完成特定工作任务或进行专项工程建设,并最终形成实物体、工程量或作业量而设立的专门资金,财政专项资金审计是提高财政专项资金的经济效益
随着二十世纪末二十一世纪初纳米材料领域的快速发展,纳米金粒子凭借其优良的的光热效应以及光声效应,在生物造影成像、癌症治疗检测等领域逐渐展现出了广阔的应用前景。显而
随着市场对穿着舒适、运动方便、健康卫生的针织产品的需求日益增加,具有良好吸湿速干和抗菌性的康纶纤维由此应运而生,并受到了越来越多的关注。本课题研究的目的是将康纶纤维
本课题对现代教育技术和职业教育的概念进行了的概括,阐述了教育技术的功能、发展背景和理论基础,论述了教育技术在职业教育领域应用的背景、目标、原则和应用的主要方面。根
智能化矿山指采用现代高新技术和全套矿山自动化设备等来提高矿山生产率和经济效益,通过对生产过程的动态实时监控,将矿山生产维持在最佳状态和最优水平。本文就智能矿山的建
中国商朝开国宰相伊尹,在组织土木基建工程的时候,让腿脚强健的人挖掘,肩脊有力的人背运,独眼的人进行测量画线,驼背的人负责粉刷地面,最大限度地发挥他们的特点。从人本管理
超临界技术是当今世界上一项既成熟又在发展中的火电技术,其效率比亚临界机组有大幅度地提高,已被国际上纳入洁净煤技术的发展轨道,具有节能和环保双重效益。从世界上第一台
通过移植启动代码,实现了Linux在SPARC多核处理器上的运行,重点剖析Linux针对SMP多核系统的进程管理机制、同步机制、进程调度和负载平衡等,在S698PM多核处理器平台进行了验
从20世纪八十年代中后期开始,学术界开始尝试从文化学和文化史的角度,探讨杜甫身上独特的人文精神、文化心态,探讨其在中国文化史上的意义。然而,迄今为止,还没有一部著作系
建党节来临之际,孟州市供电公司开展了系列活动,“五颗红心”为党的生日献礼。征文比赛展“初心”。孟州公司通过组织开展征文演讲比赛,积极挖掘在迎峰度夏、电网改造等各个