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卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一,其病死率居妇科恶性肿瘤首位,严重威胁着女性的身体健康。由于卵巢位于人体盆腔深部,且缺乏可靠有效的预防及早期检测方法,上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）患者发现时70-80%已为中晚期,存在广泛的转移,其五年生存率仅为20%-40%。然而上皮性卵巢恶性肿瘤晚期广泛转移原因在于EOC细胞迁移、侵袭能力无法预测与控制,究其原因发病机制不清。因此,在恶性肿瘤研究领域,其EOC的迁移、侵袭等恶性生物学行为一直是研究热点。恶性肿瘤发展的生物学行为及分子机制基础在于上皮细胞间质转化（epithelial—m esenchym al transition,EMT）。EMT是指上皮细胞在形态学上向间充质细胞表型转变并获得迁移能力的一个基本过程,是胚胎生理发育、伤口愈合及恶性上皮肿瘤发生发展的基础。而迫使上皮细胞发生表型改变、进而迁移、浸润至间质的始动因素在于外界因素的诱导、基因的突变、细胞膜上受体或信号通道等发生形态或功能的改变、细胞内信号转导发生转变。瞬时受体电位通道TRP就是位于细胞膜上的由多个非选择性阳离子通道组成的超级家族,对Ca2+都具有通透性,增加的Ca2+可以导致不同的生理病理变化包括细胞增殖、分化、凋亡等。其中TRPC是近年来被广泛研究的膜通道,其主要介导Ca2+内流参与多种病理生理过程,研究表明其多在种恶性肿瘤的发生、发展中起着至关重要的作用。在卵巢组织中主要表达的有TRPC1和TRPC3。本课题组前期研究表明TRPC3在卵巢癌细胞的增殖与成瘤方面有促进的作用,而在卵巢癌的迁移、侵袭机制方面尚未报道。本课题主要从三个方面展开研究TRPC3在不同人EOC细胞株中的表达以及在迁移、侵袭方面的作用。并通过siRNA对TRPC3的抑制作用,观察TRPC3基因下调后对人EOC细胞株迁移、侵袭能力的影响,并进一步探讨TRPC3在上皮性卵巢癌恶性生物学行为方面可能涉及的分子学机制,为临床上治疗卵巢复发及侵袭转移提供可能治疗靶点。目的:1.明确TRPC3在SKOV3、ES-2及HEY-T30三株人EOC细胞株中的表达水平以及与人EOC细胞迁移、侵袭的关系。2.明确TRPC3对人EOC细胞ES-2的迁移、侵袭能力的调节作用。3.初步探讨TRPC3在人EOC细胞迁移侵袭生物学功能方面的作用和机制。方法:1.在SKOV3、ES-2、HEY-T30三株人EOC细胞株之间,各取1×105个细胞进行Transwell迁移实验（不含基质胶小室）和Transwell侵袭实验（含基质胶小室）。对穿过小室的细胞进行结晶紫染色并镜下计数,分析三株人EOC细胞迁移、侵袭能力的差异性。2.培养人EOC细胞株SKOV3、ES-2、HEY-T30,选取各对数生长期细胞,提取细胞总RNA和细胞总蛋白,分别用qRT-PCR和WesternBlot法检测三株不同人EOC细胞株中TRPC3 mRNA和蛋白的表达水平。3.选择高表达TRPC3的人EOC细胞株ES-2,对其进行转染TRPC3 siRNA和Control siRNA后,提取总细胞mRNA和细胞总蛋白,分别用qRT-PCR和WesternBlo法来检测TRPC3 mRNA和蛋白的表达水平,验证其干扰效率。4.对人EOC细胞株ES-2进行转染TRPC3 siRNA和Control siRNA干扰后,取1×105个细胞进行Transwell迁移实验（不含基质胶小室）和Transwell侵袭实验（含基质胶小室）。对穿过Transwell小室的细胞进行结晶紫染色并镜下计数,分析TRPC3下调后对人EOC细胞迁移、侵袭能力的影响。5.对人EOC细胞株ES-2进行转染TRPC3 siRNA和Control siRNA后,提取细胞总蛋白,用Western Blot法检测EMT相关分子β-catenin和Snail的蛋白表达水平。6.对人EOC细胞株ES-2进行转染TRPC3 siRNA和Control siRNA后,提取细胞总蛋白,用WesternBlot法检测BMP/BMPR2相关信号通路中BMPR2的蛋白表达水平。结果:1.Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验法结果均显示,在SKOV3、ES-2和HEY-T30三种人EOC细胞株中,ES-2细胞株的迁移、侵袭能力均显著高于其他两株。2.qRT-PCR和WesternBlot实验法结果均显示,在SKOV3、ES-2和HEY-T30三种人EOC细胞株中,ES-2细胞株中TRPC3的mRNA和蛋白表达水平均显著高于其他两株。3.qRT-PCR和WesternBlot实验法结果均显示,转染TRPC3 siRNA后,EOC细胞株ES-2中的TRPC3 mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组,结果证实干扰有效。4.Transwell迁移实验（不含基质胶小室）和Transwell侵袭实验（含基质胶小室）法结果显示,转染TRPC3 siRNA后,EOC细胞株ES-2迁移、侵袭到Transwell小室下层的细胞数显著少于对照组。5.WesternBlot实验法结果显示,转染TRPC3 siRNA后,EOC细胞株ES-2中EMT相关分子β-catenin和Snail的蛋白表达水平均显著低于对照组。6.WesternBlot实验法结果显示,转染TRPC3 siRNA后,EOC细胞株ES-2中BMP/BMPR2相关信号通路中BMPR2的蛋白表达水平显著高于对照组。结论:三株不同的人上皮性卵巢癌细胞株中,其中ES-2细胞株迁移、侵袭能力明显高于中SKOV3和HEY-T30细胞株,且ES-2细胞株中TRPC3的表达亦显著高于其他两组,提示着TRPC3可能与卵巢癌恶性生物学行为有相关关系。细胞株ES-2的迁移、侵袭能力在TRPC3基因下调后明显受到了抑制,并检测到EMT相关分子β-catenin和Snail的表达同时也显著下降,提示TRPC3在上皮性卵巢癌细胞的迁移、侵袭恶性生物行为方面中扮演着重要的角色。在EOC细胞中,下调TPRC3可显著的上调BMPR2蛋白表达,提示TRPC3可能经过介导BMPR2相关信号通路,进一步激化其下游相关蛋白来促进EOC恶性生物学行为。本研究主要通过细胞水平的体外实验初步探讨了TRPC3对卵巢癌迁移、侵袭的影响,为往后进一步阐明卵巢癌侵袭转移机制和潜在的分子靶向治疗提供了初步的理论依据。