库尔勒香梨SCoT反应体系优化及优良营养系鉴定

来源 :石河子大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:cyh_sh
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库尔勒香梨原产库尔勒地区,栽培时间久远,具有品质优良、皮薄肉脆、汁丰味甜、香味浓郁、极耐储藏的优点,库尔勒香梨的品质优良,近年来库尔勒香梨已经远销国内外,成为库尔勒地区主栽的经济作物之一。随着分子生物技术的发展,运用分子技术辅助果树新品种的选育和鉴定已经成为一种趋势。本实验以库尔勒香梨和2006-2009年期间从农二师各大优良库尔勒香梨种植园选择的脱萼型、丰产型、大果型优良营养系为试材,运用SCoT分子标记方法,对实验材料进行扩增,并克隆测序,找到优良营养系与对照材料之间的碱基差异,并对优良营养系进行鉴定,为库尔勒香梨的品种鉴定研究提供技术支持。主要进行以下工作:找到适合库尔勒香梨SCoT分子标记的DNA提取方法;利用正交设计方法对SCoT-PCR反应体系进行建立和优化并利用优化的反应体系筛选引物;选择3条SCoT引物对试材进行扩增,并克隆测序,应用生物学分析软件对测序结果进行分析。主要结果如下所示:1.试剂盒法和改良SDS法适合提取库尔勒香梨基因组DNA,而试剂盒法提取的库尔勒香梨基因组DNA最适合SCoT分析。2. SCoT-PCR扩增程序和反应体系如下:反应程序:94℃预变性4min;94℃45s,50℃30s,72℃1min,循环30次;72℃8min;16℃保存。扩增产物用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。反应体系:20μL体系中包含10×buffer with Mg2+2.5μL,dNTPs1.6mmol·L-1,引物10μmol·L-1,Taq酶1.5U,DNA模板25ng。3.从筛选出的20个引物中随机选择2条引物对24份材料扩增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx对测序结果分析,结果表明扩增获得的序列与沙梨、金冠苹果、草莓、碧桃、酿酒葡萄等相关基因同源性高。4.SCoT引物S8、S12相结合能够鉴别出24份库尔勒香梨试验材料,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物的芽变优良营养系鉴定。
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