猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是一种传染性肠道病毒,其遗传变异性很高。不同年龄段的猪均可被其感染,特别是7日龄以内的猪,感染后会发生严重的水样腹泻、厌食和体重减轻,死亡率高达100%。本研究以PEDV的S2截短蛋白为抗原,建立了针对PEDV特异性IgG和IgA抗体的间接ELISA检测方法,并对本实验室制备的灭活疫苗进行了初步免疫评价。具体研究内容如下:1.猪流行性腹泻病毒间接ELISA方法的建立前期筛选了富含中和表位的S2截短基因,将其体外表达后作为ELISA包被抗原,用于捕获PEDV IgG和IgA抗体,分别以羊抗猪HRP-IgG、HRP-IgA为二抗,经过反应过程优化,建立了两种间接ELISA方法,用来筛选猪血清中PEDV IgG和IgA抗体。两种ELISA方法批内、批间的重复变异系数都在10%以下,对阳性血清进行检测,最低稀释比例均为1:800;且对猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪源牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及猪圆环病毒（PCV2）的阳性血清均无交叉反应。建立的ELISA方法与商品化PEDV抗体检测试剂盒相比较,总符合率均高于90%。本研究为PED病原监测及灭活疫苗评价提供有效的技术支持。2.灭活疫苗免疫效果评价用本研究建立的ELISA方法和商品化试剂盒相比较,同时对灭活疫苗进行初步免疫评价。以LT蛋白为佐剂和灭活的PEDV相配伍,制备成PEDV灭活疫苗。选取2头怀孕母猪（未检测到PEDV抗体）,将其分为免疫组（A组）、对照组（B组）,在产前2个月和1个月A组各口服5m L PEDV灭活疫苗、B组各口服5m L DMEM。免疫后母猪临床表现正常,未出现排毒、腹泻等不良反应。A组母猪经过免疫之后,体内可诱导产生特异性血清IgG抗体和黏膜IgA抗体,两者均呈现逐渐上升的趋势;此外,母猪乳汁中也具备较高的IgG和IgA抗体。B组母猪PEDV抗体一直为阴性。A、B两组仔猪采食5天母乳后,将其分为3组:抗体监测组、攻毒组和对照组。研究显示,A组攻毒组仅1头仔猪发生轻微腹泻,后好转,仔猪几乎没有排毒现象,100%仔猪得到有效的保护;B组仔猪全部发生水样腹泻,死亡率高达100%。病理解剖显示,A组仔猪肠组织无病变,肠道中几乎没有PEDV的分布;B组仔猪肠壁变薄、肠道内有大量淡黄色的内容物,肠绒毛出现严重的萎缩、脱落,空肠和回肠具有大量的PEDV病毒分布。最后结果显示,口服灭活PEDV疫苗,可提高母猪抗体水平,使100%的仔猪得到被动免疫保护。综上,本研究建立了两种间接ELISA方法,来筛选猪血清中的PEDV IgG和IgA抗体,并对PEDV灭活疫苗进行了初步免疫评价,研究显示,通过采食母乳100%的仔猪得到了有效的被动免疫保护。本研究为PED病原流行情况的进一步监测和防控提供了更多有效的技术手段,为PEDV的预防和消除提供理论支持。