论文部分内容阅读
目的:1．通过类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）动物模型，研究黑骨藤配伍金铁锁抗RA的物质基础。2．通过RA动物模型，研究黑骨藤、金铁锁与桂枝芍药知母方组成的新苗方抗RA的物质基础。 方法:1．采用紫外分光光度法，建立黑骨藤配伍金铁锁的总皂苷、总黄酮的含量测定方法。以总黄酮和总皂苷的含量为评价指标，采用正交试验优选乙醇提取工艺，并通过大孔吸附树脂技术制备纯化物。建立佐剂关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型，对乙醇提取物和纯化物进行药效学研究。以大鼠足趾厚度、痛阈值、炎性组织前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)含量、血清中丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物岐化酶(superoxide dismutase，SOD)活力为评价指标，对比醇提取物和纯化物对AA大鼠的影响。2．通过文献研究并结合导师临床治疗类风湿关节炎的经验，将黑骨藤、金铁锁与中医经典方合理的组成新苗方。建立AA大鼠模型，对黑骨藤配伍金铁锁、桂枝芍药知母方和新苗方的水提取物进行药效学研究。以大鼠足趾厚度、痛阈值、炎性组织PGE2含量、血清中MDA含量和SOD活力为评价指标，对比桂枝芍药知母方提取物和新苗方的提取物对AA大鼠的影响。3．对新苗方进行拆方研究，采用高效液相色谱法，建立桂枝芍药知母方中芍药苷的含量测定方法。用含量测定结果结合小鼠抗炎、镇痛模型优选桂枝芍药知母方的最佳提取溶剂。以芍药苷为评价指标，正交试验筛选药材提取工艺，以大孔吸附树脂技术纯化最佳提取物，获取桂枝芍药知母方的纯化物。将桂枝芍药知母方的纯化物与黑骨藤配伍金铁锁的纯化物进行组合，形成新苗方纯化物。4．建立AA大鼠模型，对桂枝芍药知母方的纯化物、黑骨藤与金铁锁的纯化物、新苗方纯化物和新苗方提取物进行药效学研究。以大鼠足趾厚度、痛阈值、炎性组织PGE2含量、血清中MDA含量和SOD活力为评价指标，对比桂枝芍药知母方的纯化物、黑骨藤与金铁锁的纯化物、新苗方纯化物、新苗方提取物对AA大鼠的影响。 结果:1．齐墩果酸在2.66～21.28μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，回归方程为A=78.774C-0.0131，r=0.9995，总皂苷平均回收率为99.48％。芦丁在10～120μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，回归方程为A=12.149C+0.0102，r=0.9997，总黄酮平均回收率为97.05％。黑骨藤配伍金铁锁乙醇提取工艺为:70％乙醇，料液比1∶10，提取时间1.5h，提取2次。黑骨藤配伍金铁锁纯化工艺为:AB-8型大孔吸附树脂，上样浓度为70mg·mL．1，上样量∶树脂用量=1∶2.4，以6BV的水洗脱，再以8BV30％乙醇、80％乙醇洗脱。药理实验结果表明，黑骨藤配伍金铁锁纯化物对关节红肿的动物模型治疗效果较雷公藤多苷片差。2．药理实验结果表明:新苗方水提物抗RA优于黑骨藤配伍金铁锁水提物。3．芍药苷在20～140μg·mL-1范围内呈良好的线性关系，回归方程为A=107C-5602.2，r=0.9995，平均回收率为97.7％。桂枝芍药知母方提取工艺为:水，料液比1∶10，提取时间2h，提取3次。桂枝芍药知母方纯化工艺为:D101型大孔吸附树脂，上样浓度为160mg·mL-1，树脂体积与上样体积比为1∶6，以6BV的水洗脱，再以4BV30％乙醇洗脱。4．药理实验结果表明，新苗方水提物及纯化物抗RA作用优于黑骨藤配伍金铁锁纯化物。表现为:减轻足肿胀、提高痛阈值，降低PGE2含量，提高SOD活力，减少MDA生成。 结论:本课题提出的新苗方及其纯化物具有抗类风湿关节炎的作用，其效果优于黑骨藤配伍金铁锁的纯化物。新苗方的提出可以为治疗类风湿关节炎提供更多的物质基础。