论文部分内容阅读
目的:探讨平喘宁调节寒哮大鼠肺组织PI3K-Akt/PKB信号通路中相关蛋白干预哮喘气道重塑的效应机制。利用免疫组化、Rt-PCR等方法以观测寒哮大鼠肺组织中PIP3、PDK2、IKKα、p110β、CDK2相关蛋白表达水平以及平喘宁对其表达水平的影响,进而探讨平喘宁对于延缓寒哮大鼠气道重塑的作用机制。方法:挑选140只、SPF级、健康的雄性SD大鼠(6-8周龄,体重180-220克),采取随机分组,分成模型组、正常组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁大剂量组、平喘宁中剂量组以及平喘宁小剂量组等7组,每组平均20只。在进行适应性饲养结束后地第1d、第8d分别向每只(正常组每个大鼠代替以1ml生理盐水向其腹腔注射)大鼠腹腔注射1ml配置好的卵蛋白溶液使其致敏。从第15d始持续1周采用1%的卵蛋白溶液对大鼠进行超声雾化吸入,并每日每次30min予大鼠以寒冷刺激,制造寒哮模型。自第21d起,给予大鼠灌胃给药治疗,连续28d,其中5个治疗组大鼠的灌药量,依据大鼠与人体的体表面积换算按量给药,正常组、模型组2组大鼠每日灌服相同量的生理盐水。在28d灌胃给药结束后,用卵蛋白行最后一次激发后地2h内解剖大鼠,-80℃冻存取出地大鼠右肺组织,福尔马林固定左肺组织待检测。随后以HE染色法检测实验后大鼠肺组织的病理学改变,以免疫组化法检测肺组织中CDK2、p110β的表达水平,同时利用Rt-PCR法检测肺组织中PIP3、PDK2、IKKα的表达丰度。结果:经HE染色后的病理图片观测到,模型组大鼠肺组织呈现出嗜酸性粒等炎症细胞浸润的变化、气道黏膜皱襞增多增厚、气道变得狭窄等现象,相比较于正常组明显;其余5个治疗组肺组织地上述现象受到抑制,较之于模型组其表现程度不同。免疫组化法检测:同正常组作比较,其余6组肺组织中p110β、CDK2蛋白地表达水平明显升高,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);跟模型组比,5个治疗组肺组织p110β、CDK2表达水平俱下降(P<0.05,P<0.01);平喘宁大、中、小剂量组三组间进行相比,大、中剂量组治疗效果优于低剂量组(P<0.05,P<0.01);其中平喘宁大剂量组肺组织p110β、CDK2地表达水平下调最为突出,且较之于地塞米松组、桂龙咳喘宁组效果更优(P<0.05,P<0.01),统计学意义更显著。Rt-PCR法检测:较之正常组,另外6组肺组织内PIP3、PDK2、IKKα地表达水平均有所上升(P<0.05,P<0.01);相较于模型组,5个治疗组PIP3、PDK2、IKKα地表达水平俱下调(P<0.05),特别以平喘宁大剂量组下调最是显著。结论:平喘宁可调控PI3K-Akt/PKB通路p110β、CDK2的表达,以及下调PIP3、PDK2、IKKα的表达水平,从而减轻寒哮大鼠气道炎症反应,降低其气道高反应性并可减缓气道重塑进程而治疗哮喘。