目的:血小板是血液的重要组成部分,血小板在血栓的形成和生理性止血的过程中具有重要的作用。当血小板活化功能异常时,会促使病理性血栓的形成,病理性血栓是导致心肌梗塞,高血压,脑卒中等心血管疾病形成的重要原因。目前,治疗心血管疾病的核心策略之一是及时的进行抗血小板的治疗。因此,探究血小板在体内成栓的机制为临床上治疗与血栓形成相关的心血管疾病提供新的治疗途径。在体内lncRNA具有丰富的生物学功能,特别是lncRNAMALAT1,在多种肿瘤的发展中具有重要的临床意义。现在有研究发现一些lncRNA与心血管疾病的发生与发展关系密切。但是血小板中lncRNA的研究相对较少,我们通过对血小板高聚集率人群和低聚集率人群的测序结果发现lncRNAMALAT1在血小板中的表达量显著并且在两组人群中具有显著的表达差异。大量的文献研究表明,lncRNA MALAT1主要表达于细胞的细胞核中,而血小板是无核的细胞,这一表达的差异性引起了我们的注意。使我们做出假设:lncRNA MALAT1对血小板的活化作用产生影响,从而影响体内血栓的形成。方法:(1)我们利用si-RNA建立lncRNA MALAT1敲低的MEG-01细胞模型,通过MEG-01细胞和血小板类似物PLP的粘附和铺展实验,血小板类似物PLP表面抗体检测实验和检测血小板类似物PLP颗粒的大小和数目的实验在体外探究lncRNA MALAT1敲低对于MEG-01以及其所产生的PLP功能的影响及其作用机制。(2)通过尾静脉注射lncRNAMALAT1慢病毒,建立lncRNAMALAT1敲低的小鼠模型,通过对小鼠血液指标的分析、小鼠血小板的铺展实验,小鼠断尾出血实验,Fecl3诱导的小鼠肠系膜动脉血栓实验,微流控剪切力实验和利用流式检测小鼠血小板上活性标志物α Ⅱ bβ3和P-Selectin实验来探究lncRNA MALAT1对小鼠血小板活化功能的影响。(3)通过对MEG-01细胞进行核质分离和FISH(荧光原位杂交),确定lncRNA MALAT1在MEG-01细胞和血小板上的定位。通过Western blot检测与血小板活化相关的通路PI3K/Akt中Akt,P-Akt,PDK1,GSK-3β的表达情况。结果:实验结果表明,(1)通过对血小板高聚集率和低聚集率人群的测序结果分析,发现lncRNAMALAT1在两组人群中具有明显的表达差异。并且通过荧光定量PCR检测lncRNAMALAT1在小鼠血小板和人血小板中均为高表达。加入凝血酶刺激MEG-01细胞中,lncRNAMALAT1表达随着凝血酶刺激的时间的增加而降低,具有时间依赖性。利用凝血酶刺激MEG-01细胞和细胞分泌的血小板类似物PLP,MALAT1 KD组的细胞和血小板类似物PLP的粘附和铺展能力都明显增加。通过流式检测MALAT1 KD组分泌的血小板类似物PLP的体积和活性都明显上升。(2)在动物实验上,我们通过对小鼠的血液指标进行分析,发现小鼠的各项指标都在正常范围内,说明lncRNAMALAT1缺失不会影响小鼠正常的造血功能。但MALAT1 KD组小鼠断尾出血时间明显缩短,在Fecl3诱导下小鼠肠系膜动脉更容易形成血栓,全血在5dyn/cm2剪切力的作用下更容易与纤维蛋白原相结合形成血栓,并且血小板在凝血酶的作用下更容易在纤维蛋白原上铺展,血小板上整合素αⅡbβ3的活性更高。(3)在作用机制上,我们利用荧光原位杂交实验确定lncRNAMALAT1主要表达在MEG-01的细胞质中,lncRNAMALAT1在血小板上分布的比较广。通过Western blot检测发现,lncRNAMALAT1敲低能够增加MEG-01细胞和血小板中Akt的磷酸化水平,降低PTEN和GSK-3β的磷酸化水平。结论:以上数据说明,lncRNAMALAT1在血小板活化的过程中起到非常重要的作用。lncRNA MALAT1可以通过调控PI3K/Akt通路促进Akt磷酸化,抑制其下游靶蛋白GSK-3β从而使整合素αⅡbβ3的构象发生改变,促进血小板的活化,进而影响血栓的形成。这为lncRNAMALAT1治疗人体内病理性血栓提供理论基础。