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目的1.研究SYF2在人类食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达情况,初步分析SYF2异常表达与ESCC发生发展的关系。2.利用血清饥饿释放试验研究食管鳞癌细胞株ECA109和TE1增殖过程中SYF2的表达变化,初步探讨SYF2在此过程中的作用,旨在能够进一步揭示人类食管鳞癌的分子发病机制,以期为人类食管鳞癌的治疗提供新的靶点。方法1.在组织水平,采用Western blot技术检测8例ESCC及癌旁新鲜冰冻组织中SYF2和PCNA(增殖指标)的表达情况;采用免疫组化方法检测90例ESCC组织石蜡切片中SYF2和Ki-67(增殖指标)的表达情况,并结合ESCC临床病理资料分析SYF2与ESCC患者的年龄、性别、肿瘤分级和转移等因素之间的关系,Kaplan-Meier法分析ESCC患者生存率,采用单因素和Cox危险比例模型多因素分析SYF2与ESCC预后的关系。2.在细胞水平,采用血清饥饿释放试验同步化处理两株食管鳞癌细胞(ECA109和TE1细胞),分别检测两株ESCC细胞的细胞周期变化(运用流式细胞仪技术),并采用westernblot实验方法检测血清饥饿释放过程中syf2、pcna和cyclind1的表达情况。3.在细胞水平,干扰syf2表达后用流式细胞仪检测细胞周期,westernblot检测syf2、pcna和cyclind1的表达变化,cck8实验、克隆形成实验检测食管鳞癌细胞增殖情况。4.在细胞水平,将化疗药物-顺铂分别引入eca109和te1细胞中,检测顺铂(cisplatin)作用后syf2的表达变化,及干扰syf2后escc细胞对顺铂的耐受变化。结果1.westernblot和免疫组化分析显示,syf2在escc组织中的表达明显高于对应的癌旁组织。syf2的表达强度与escc病理分级(p=0.000)以及ki-67(p=0.001)之间差异有统计学意义。kaplan-meier分析显示syf2在escc中的高表达与患者总生存率及无病生存率的降低显著相关(p<0.01)。单因素分析表明syf2与escc患者的不良预后有关(p=0.002)。cox危险比例模型分析显示syf2可做为escc预后的独立指标(p=0.005)。2.血清饥饿造成eca109和te1细胞生长周期停滞,syf2蛋白表达下降,与此同时,pcna和细胞周期蛋白cyclind1的表达水平也降低。血清释放后刺激eca109和te1细胞增殖,上述分子呈现相反的变化。干扰syf2的表达后,增殖指标pcna和cyclind1的表达降低,食管鳞癌细胞株的增殖受到抑制。3.干扰syf2表达后,eca109和te1细胞生长周期停滞,细胞周期蛋白pcna和cyclind1的表达水平也降低。cck8实验、克隆形成实验显示食管鳞癌细胞增殖被抑制。4.顺铂(cisplatin)作用后,食管鳞癌细胞生长被抑制。干扰syf2表达后,escc癌细胞对顺铂的耐受性明显下调。结论1.在组织水平发现SYF2在癌组织中高表达,与人类食管鳞癌患者的不良预后有密切关系,提示SYF2可能与ESCC的发生发展密切相关,可作为影响人类食管鳞癌患者预后的指标之一。2.在细胞水平发现SYF2可能是通过调节细胞周期从而影响ESCC细胞的存活。干扰SYF2使ESCC癌细胞对顺铂的耐受性明显下调。SYF2有望成为ESCC的临床监测指标及潜在治疗靶点。