树莓超氧化物歧化酶的化学修饰及固定化研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nihaoalinlin
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
超氧化物歧化酶是体内自由基主要清除剂之一,简称为SOD。现已证明树莓是富含SOD的水果资源。本文首先以树莓为原料,通过盐析、凝胶层析等步骤对树莓SOD进行提取纯化,然后针对SOD作为药用酶稳定性差的缺陷,对树莓SOD进行了化学修饰与固定化研究。这些为对树莓SOD的进一步深入研究及其在药品、保健食品和化妆品方面的应用打下了一定基础。 本文在前人研究的基础上,拓展了关于SOD化学修饰的新思路:在对SOD进行分子改造的同时,着重于扩展其功能,使之成为具备复合型功能的酶分子。本文选用了具备清除自由基、增强免疫等功能的壳聚糖作为修饰剂对SOD进行改造。 首先,应用四种氧化降解法,主要包括:H<,2>O<,2>降解法、HAC-H<,2>O<,2>降解法、H<,2>O<,2>-NaClO降解法和NaBO<,3>降解法,在优化条件下制备了四种低聚水溶性壳聚糖。用四种低聚水溶性壳聚糖对树莓SOD进行化学修饰,H<,2>O<,2>降解法制备的低聚水溶性壳聚糖作为修饰剂得到的修饰酶总活力较高,可达到712.38U/mL。SOD经H<,2>O<,2>降解法制备的低聚水溶性壳聚糖修饰后,SOD氨基修饰率为59.27%,SOD活性保持度为63.12%。修饰SOD的温度稳定性、pH稳定性均明显提高,同时与天然SOD相比,修饰SOD的木瓜蛋白酶酶切耐受性明显增强。修饰SOD的体外半衰期为486.71h,天然SOD的体外半衰期为94.27h,修饰酶的体外半衰期较天然酶体外半衰期延长了约四倍。结果表明,低聚水溶性壳聚糖修饰SOD是可行的,低聚水溶性壳聚糖可作为一种较好的修饰SOD的化学修饰剂。 壳聚糖具有良好的生物相容性和生物降解性,分子中游离氨基多,反应活性好,是固定化酶的良好载体,有着广泛的应用前景。 本文对壳聚糖采取不同处理方法,将其用于对树莓SOD进行固定化,比较酶活力及酶活回收率,筛选出了较优的壳聚糖载体的制备方法,结果表明,壳聚糖粉固定化SOD和网状壳聚糖固定化SOD,酶活力和酶活回收率均较理想。分别确定了壳聚糖粉固定化SOD和网状壳聚糖固定化SOD制备的最佳条件,并考察固定化SOD的酶学性质。 壳聚糖粉固定化SOD研究表明,以壳聚糖粉为载体,戊二醛交联法制备固定化SOD,优化条件下活化中戊二醛浓度取0.4%制备的固定化酶,所得壳聚糖酶粉活力192U/g,酶活回收率为34%,热稳定性和酸碱稳定性较天然酶有很大的提高,且具有良好的贮存稳定性,固定化酶粉可实现反复使用,提高了利用率,壳聚糖粉可用于制备固定化SOD。网状壳聚糖固定化SOD研究表明,以网状壳聚糖作为载体,戊二醛为交联剂,在最佳固定化反应条件下,网状壳聚糖载体制备过程中,戊二醛浓度取1.0%,固定化反应中戊二醛浓度取0.1%,所得固定化SOD酶活力为330U/g,酶活回收率为58.33%,热稳定性和酸稳定性较天然酶有很大的提高,且具有良好的贮存稳定性,固定化酶可实现反复使用,提高了利用率。结果表明,以戊二醛预交联的网状壳聚糖作为载体可用于制备性能较优的固定化SOD。
其他文献
女装设计的性质决定了设计必须服从社会的需求,女装设计系列课程的教学应与时俱进,以适应行业生产的需要。因此我们应把课程目标、课程实施、课程评价等方面作为女装设计课程
最使我震撼和无语的是那张夕阳下的大中里被拆迁的照片,废墟中两个矗立的石库门门框就如同两座墓碑,落寞庄严,它在警示我们如何来保护石库门,如何让我们的历史不再被中断。“
激光加工多孔端面机械密封(LST-MS)是一种新型的流体动压型机械密封,其最大的优点就是运转中的两个机械密封端面处于非接触状态。因为端面微孔可以捕捉磨粒并且储存润滑介质,所
本文以刺嫩芽为原料详细研究了提取分离皂甙的方法与条件,确定了最佳提取工艺,初步鉴定了刺嫩芽总皂甙的类型,并研究了皂甙作为抗氧化剂在猪油中的应用及其在自由基反应体系中清
由于化石燃料燃烧而排放的大量的温室气体CO2对环境造成的危害已引起了全球的高度关注。在众多的CO2分离捕集技术当中,O2/CO2燃烧技术作为一种新型的可低成本分离回收CO2:且污
本文探讨含湿多孔介质导热系数的测试准确性及其影响因素。利用实验测量堆积型多孔介质在不同含湿率时的导热系数,并深入观察和认识孔隙内水分形态、分布及加热时水分演化过
大豆低聚糖是大豆中可溶性碳水化合物的总称,主要含有蔗糖、棉子糖和水苏糖,其中棉子糖、水苏糖是具有功能性的低聚糖,能够促进双歧杆菌增殖,抑制肠道内腐败产物生成,保护肝脏,预防
太阳能吸热器是一种将太阳能转化为热能的装置,其热转换效率会直接影响到整个太阳能系统的效率和经济性。由于太阳能的间歇性和空间分布的不均匀性,会导致吸热器壁面产生很大
乙酸作为挥发酸的重要组成部分,含量过多是造成啤酒偏酸的主要因素。酿酒酵母染色体上ald。基因编码的乙醛脱氢酶是控制乙酸发酵的关键酶,乙醛脱氢酶的活性高时乙酸产生的量多
花木盆景三十载,日暖和风遍地开,誉满五州及四海,推陈出新辉煌来。图文并茂人人爱,传播知识好平台,良师益友都称赞,文明之风普天外。岁月流转,逝者如斯,《花木盆景》迎来了创