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番茄和其真菌病原菌Cladosporum fulvum的互作符合基因对基因学说。本研究鉴定出一个新的番茄抗叶霉病基因,能够识别病原菌C.fulvum在侵袭番茄叶片时分泌到胞间隙中的胞外蛋白(Extracelluarproteins,ECPs)ECP3,并启动过敏性坏死反应(Hypersensitive response,HR),因此将该抗性基因命名为:Cf-ECP3。在一个由192株组成的F2群体内对该抗性基因的分离情况进行分析,发现该抗性是由一个显性基因控制的。扩增后的限制性酶切多态性标记(Cleaved AmplifiedPolymorphic Sequences,CAPS)分析进一步将Cf-ECP3精密作图于番茄第一条染色体短臂上的Orion位点,与一个CAPS标记CT116共分离。用一个Hcr9(Homologous of Cladosporium resistance gene Cf-9,Hcr9)探针进行的RFLP分析进一步表明,该抗病基因与一个1.6kb的BglⅡ和一个1.6kb的Sst Ⅰ片段共分离,这个结果暗示了Cf-ECP3可能象番茄第一条染色体短臂上的其它Cf基因:Cf-4和Cf-9一样属于Hcr9家族。由于另外一个Cf-ECP2基因也作图定位于Orion位点,因此Orion位点将是番茄第一条染色体短臂上Milky Way位点之外的又一个包含有功能Cf基因的复杂的基因座位。 由于对番茄第一条染色体短臂上分布的Hcr9基因簇的结构和组织形式、Hcr9的进化及新的Cf基因演化机制的兴趣,本研究应用了依图谱克隆(map-based cloning)和侯选基因(candidate gene)相结合的策略对Cf-ECP3及该基因所处的Orion基因簇进行克隆分析的探索。构建了一个含有该基因的phage基因组文库,用一个Hcr9探针筛选文库,获得37个含Hcr9的阳性克隆。经限制性酶切、DNA杂交技术和DNA指纹技术,最终将含有至少一个Hcr9基因的所有的克隆排列进三个主要的contigs,另外还有五个单独的克隆不能归入以上任何一个contig中。其中的一个克隆能与CT116和Hcr9探针杂交,说明该克隆是Orion位点的组成部分。应用PCR策略,对每个contig及 部分单独的克隆进行PCR反应,并将产物进行部分序列分析,然后与 目前所己失的Hcrg 基因簇的DNA序歹进行 b较发现:contig的四 个Hcrg分别与Moneymaker co)的NL位点的NL心。NL0、 NL.OD和 NL-OE非常相似,但缺少了 NL-OB。而另外一个单独的克 隆(克隆6)的Hcrg则与NL刀 非常相象。这些分析结果说明基因重复 (gene duplication)和基因移位(gene translocation)在 Hcrg 基因簇 的演变过程中,起了一定的作用。这些知识将有助于对Hcrg基因的 进化及新的Q基因序列产生机制的理解,从而为符合基因对基因学说 的R基因的进化提供根据。