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目的:分别建立人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)阿霉素(Adriamycin,ADM)及利妥昔单抗(Rituximab,RTX)耐药细胞株,检测耐药株形态,增殖,药物敏感性的变化及多药耐药基因1的(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达情况,探讨化疗药物与RTX之间是否存在交叉耐药现象。为DLBCL耐药研究奠定模型基础,对DLBCL继发耐药后的临床用药提供理论依据。方法:1.以体外低浓度梯度递增法诱导构建人耐阿霉素DLBCL细胞株Pfeiffer/ADM和耐RTX DLBCL细胞株Pfeiffer/R。2.显微镜下比较亲代及耐药细胞株的形态变化。3.运用细胞计数法,绘制亲代和耐药细胞株的生长曲线,计算倍增时间。4.阿霉素、依托泊苷(etoposide,VP-16)、长春新碱(vincristine,VCR)对Pfeiffer、Pfeiffer/ADM、Pfeiffer/R作用72h后,运用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况,计算半数抑制浓度IC50。5.以健康人血清作为补体来源,1μg/mL,3μg/mL,10μg/mL,30μg/mL的RTX作用于Pfeiffer、Pfeiffer/ADM、Pfeiffer/R细胞株6h后,运用CCK-8法比较耐药细胞株及亲代细胞对RTX介导的补体依赖性细胞毒性(complement-dependent cytotoxicity,CDC)的差别。6.实时荧光定量PCR检测Pfeiffer、Pfeiffer/ADM、Pfeiffer/R细胞株中MDR1mRNA的表达情况。结果:1.成功构建耐ADM细胞株Pfeiffer/ADM及耐RTX细胞株Pfeiffer/R。2.显微镜下,Pfeiffer、Pfeiffer/ADM、Pfeiffer/R在细胞形态上无明显差别。3.Pfeiffer,Pfeiffer/ADM,Pfeiffer/R的倍增时间分别为(32.28±1.18)h,(31.41±2.03)h及(32.03±1.77)h,三细胞株体外增殖速度相似,差异无统计学意义(p>0.05)。4.通过cck-8法测得adm,vp16,vcr对pfeiffer的ic50值分别为(0.038±0.0090)μg/ml,(0.26±0.045)μg/ml,(0.0093±0.0023)μg/ml,对pfeiffer/adm的ic50值分别为(0.48±0.049)μg/ml,(3.42±0.45)μg/ml,(0.16±0.0032)μg/ml,计算耐药指数分别为12.87,13.18,16.85,表明pfeiffer/adm具有多药耐药性。而adm,vp16,vcr对pfeiffer/r的ic50值分别为(0.038±0.046)μg/ml,(0.25±0.13)μg/ml,(0.0098±0.00014)μg/ml,与pfeiffer比较差异无统计学意义(p>0.05),提示pfeiffer/r对化疗药物adm、vp-16和vcr依旧敏感。5.以健康人血清作为补体来源,1,3,10,30μg/ml的rtx作用于pfeiffer、pfeiffer/adm、pfeiffer/r细胞株6h后,对pfeiffer细胞的抑制率分别为28.58%,47.06%,69.00%,77.20%,对pfeiffer/adm为30.33%,47.21%,64.63%,72.53%,与pfeiffer细胞比较,差异无统计学意义(p>0.05),提示pfeiffer/adm对rtx依旧敏感。pfeiffer/r细胞的抑制率分别为11.04%,24.12%,40.56%,53.58%,与pfeiffer细胞比较,差异具有统计学意义(p<0.05),提示pfeiffer/r对rtx产生耐药。6.qrt-pcr检测发现,pfeiffer和pfeiffer/adm细胞的mdr1mrna的相对表达量分别为(1.00±0.10)和(82033.27±4187.24),差异具有统计学意义(p<0.001)。然而pfeiffer与pfeiffer/r细胞的mdr1mrna的相对表达量分别为(1.03±0.33)和(3.00±1.32),两者差异无统计学意义(p>0.05)。结论:运用低浓度梯度递增法可成功构建耐阿霉素人dlbcl细胞株pfeiffer/adm和耐rtx人dlbcl细胞株pfeiffer/r。pfeiffer/adm具有多药耐药性,其mdr1基因表达明显上调,对rtx介导的cdc效应仍敏感;pfeiffer/r对rtx介导的cdc效应产生耐药,但对化疗药物vp-16、vcr、adm仍敏感,其mdr1基因表达无明显变化。提示化疗药物vp-16、vcr、adm与rtx之间无交叉耐药。本研究所构建的耐药细胞株是进行下一步耐药机制或逆转耐药研究的理想模型。