Cks1对胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响

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目的:周期素依赖性蛋白激酶亚单位1 (Cks1-Cyclin-dependent protein kinase subunit 1),是一种高度保守的调控细胞周期进程的关键性的调节蛋白,对细胞周期的调控起到重要的作用。国内外研究发现Cks1可引起多种肿瘤的发生及病变并在多种肿瘤中都有不同程度的异常表达,本研究旨在探讨Cks1在胶质瘤细胞中的表达及其对胶质瘤细胞生物学功能的影响。方法:本研究首先运用免疫组织化学染色(IHC)、免疫荧光实验(IF)及QRT-PCR实验,检测了 Cks1在正常脑组织、胶质瘤组织及正常星形胶质细胞(HA)、胶质瘤细胞(U87MG)中的表达;然后我们以胶质瘤细胞系U87MG为研究对象,对其进行Cks1siRNA慢病毒感染,应用QRT-PCR、Western Blot实验技术检测感染siCks1后Cks1的抑制效果;为了解其对胶质瘤细胞系细胞增殖能力的影响设计进行CCK-8、集落形成(平板克隆)实验,运用Transwell技术及细胞划痕实验探索胶质瘤细胞在抑制Cks1表达之后侵袭、迁移能力的改变,最后,应用Western Blot实验技术检测MEK、ERK及p-ERK等因子的变化。结果:免疫组织化学、免疫荧光及QRT-PCR实验结果显示Cks1在胶质瘤细胞中有表达,表达定位于细胞核内,并且U87胶质瘤细胞中Cks1的表达量较HA正常星形胶质细胞中Cks1的表达量低。慢病毒感染后,QRT-PCR、Western Blot实验技术检测感染siCks1后Cks1的抑制效果,结果显示抑制组siCks1 1#、siCks13#抑制效果较siCks1 2#抑制效率高,统计分析差异有统计学意义(P< 0.05);CCK8、集落形成(平板克隆)实验结果显示,抑制Cks1表达后,与空白对照组相比胶质瘤细胞增殖能力增强,而Transwell技术及细胞划痕实验结果显示,抑制Cks1表达后,与空白对照组相比胶质瘤细胞侵袭及迁移能力均增强,统计分析差异有统计学意义(P< 0.05); Western Blot结果显示MEK、ERK表达未减少但p-ERK表达量增多,统计分析差异有统计学意义(P<0.05)。本课题为寻找治疗胶质瘤的作用靶点提供了新的思路和理论依据。结论:1、Cks1在胶质瘤细胞中有表达,并定位于细胞核,并且胶质瘤细胞中Cks1的表达量较正常星形胶质细胞中Cks1的表达量低。2、抑制Cks1的表达,胶质瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力增强。3、抑制Cks1的表达,胶质瘤细胞中ERK磷酸化水平升高,Cks1可能通过p-ERK的变化促进胶质瘤细胞的增殖进而影响胶质瘤的发生。
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