牛精液冷冻稀释液新配方研究

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本研究所用精液采自西门塔尔、夏洛莱、利木赞和安格斯各3头种公牛,通过改变牛精液冷冻保存液组成成分,检测了不同种公牛冷冻前后精子活力、顶体完整率及精子畸形率,从而了解不同个体和品种对精液冷冻效果的影响,并筛选出牛精液冷冻稀释液新配方,以提高牛精液冷冻保存的效果,提高人工授精受胎率。试验及主要结果如下:1、为了分析用大豆卵磷脂替代卵黄的精液冷冻保存效果,并筛选大豆卵磷脂最适浓度,分二个试验。①在牛冷冻精液稀释液国家标准推荐的配方基础上,添加1%、3%、5%、7%、9%的大豆卵磷脂替代卵黄。结果发现:当卵磷脂浓度为3%时,精液解冻后精子活率(为42.11±3.62%)显著高于对照组(冻后活力为38.334±2.45%,p<0.05)。卵磷脂浓度为5%时,解冻后活力为41.004±3.77%,仍高于对照组(p>0.05)。冻后各组精子顶体完整率和畸形率差异较小(p>0.05)。②以Tris-柠檬酸缓冲液为稀释液,添加1%、3%、5%、7%、9%的大豆卵磷脂替代卵黄,结果发现:当卵磷脂浓度为3%时,精液解冻后精子活力(39.56±3.40%)高于对照组(35.89±2.32%,p>0.05),而各组精子顶体完整率和畸形率没有显著差异(p>0.05)。因此,牛冷冻稀释液中添加3%和5%的卵磷脂冷冻效果较好。2、为了比较甘油(G)、乙二醇(EG)和二甲基酰胺(DA)三种抗冻保护剂两两配合的冷冻保护效果,分别设置了1%、3%、5%三个浓度两两正交组合,结果发现:5%G+3%EG、5%G+3%DA、3%EG+3%DA几个试验组效果较好,冻后活力分别为40.334±2.52%、38.674±1.15%、39.004±1.00%,均高于各自的对照组(p>0.05)。其中5%G+3%EG解冻后活力最高,精子顶体完整率也较高,畸形精子较少。3、为了比较甘油(G)、乙二醇(EG)和二甲基酰胺(DA)三种抗冻保护剂联合应用的冷冻保护效果,分别设置了1%、3%、5%三个浓度进行正交组合,结果发现:1%G+3%EG+3%DA组合冷冻效果最好(冻后活力达40.004±2.65%),高于对照组(p>0.05)。但解冻后顶体完整率在各试验组间,试验组和对照组间差异均不显著(p>0.05)。4、为了分析牛个体和品种对精子冷冻解冻的影响,分别取西门塔尔(XM)、利木赞(LM)和夏洛莱牛(XL)的精液进行冷冻,并检测了精子冷冻前后活力、冷冻后顶体完整率和精子畸形率。结果:XM、LM和XL鲜精活力无明显差异(p>0.05)。但是冷冻解冻后,XL精液冻后活力显著低于XM和LM(p<0.05),顶体完整率和畸形率差异不显著(p>0.05)。
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