缺氧以及血管内皮生长因子对视网膜色素上皮细胞opticin表达的影响

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ysabby2008
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摘要目的:探讨缺氧血管内皮生长因子对视网膜色素上皮细胞opticin分泌的影响及内在机制。方法:原代培养人眼视网膜膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞,取生长良好的第3-6代细胞接种于含DMEM培养液的六孔板中,于缺氧条件下或加入不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF) (lng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)进行培养,RIPA裂解液裂解细胞提取总蛋白并收集细胞培养液。逆转录PCR检测缺氧后RPE细胞中opticin、VEGF mRNA的表达。蛋白印迹法检测细胞内和细胞培养液中的opticin的含量。明胶酶谱法用于检测细胞培养液中的明胶酶活性。各组数据采用单因素方差分析。结果:逆转录PCR显示缺氧后RPE细胞opticin mRNA表达未受影响,而VEGF mRNA表达升高。蛋白印迹法显示缺氧后RPE细胞内opticin的含量与对照组无显著差异,而在RPE细胞培养液中缺氧组opticin含量明显下降。不同浓度的外源性的VEGF作用同样不影响RPE细胞内opticin的表达,差异无统计学意义(F=2.29,P=0.095),而在VEGF添加组RPE细胞培养液中opticin含量较正常组明显下降(F=107.28,P<0.001)。明胶酶谱结果显示,在与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMP)2型相对应的位置出现明显的消化条带,且酶的活性随VEGF浓度的增加而递增。低浓度EDTA可抑制由VEGF引起的RPE细胞培养液中opticin含量的减少。结论:缺氧以及VEGF作用可影响RPE细胞的opticin分泌,可能与增多的MMP-2对opticin的酶解作用有关。
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