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HSP70是一个高度保守的蛋白,其在蛋白的合成、折叠、转运以及抗原的加工递呈过程中均具有重要作用。研究表明,HSP70可作为一种分子载体,增强与其结合蛋白的抗原性。汉滩病毒是布尼亚病毒科汉坦病毒(Hantaviruses,HV)的血清型之一,为单股负链RNA病毒,其基因组有大(L)、中(M)、小(S)3个片段组成,分别编码病毒相关的依赖RNA的RNA聚合酶、囊膜糖蛋白(glycoprotein,GP)G1和G2及核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein.NP)四种结构蛋白。其中NP具有很强的抗原性和免疫原性,刺激机体产生抗体出现时间早、滴度高、持续时间长,而且也是CTLs(CytotoxicT lymphocytes)识别的主要抗原之一。本实验室以往研究发现,HTNV感染的动物体内存在HSP70-NP复合物。基于NP的汉坦病毒免疫一直受到广泛研究,而将HSP70与汉滩病毒76-118株S基因相结合用于抗HTNV免疫尚未见报道。 本研究构建了HSP70与HTNV S融合蛋白疫苗与基因疫苗,以HSP70为疫苗载体(免疫佐剂),HTNV NP为靶抗原,研究疫苗对机体体液及细胞免疫作用的影响。 1.HSP70-NP融合蛋白原核表达载体的构建、表达与鉴定分别构建了pGEX-4T-1/HSP70-S,pGEX-4T-1/HSP70,pET28a/S三种原核表达载体。用IPTG对含有pGEX-4T-1/HSP70-S,pGEX-4T-1/HSP70