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研究背景:胃癌不论在中国还是世界范围内都是最常见的恶性肿瘤之一,一直伴随着高发病率和死亡率,高死亡率的主要原因是早期胃癌难以及时发现,而晚期胃癌容易发生转移,药物治疗效果也并不令人满意。尽管近年来已有研究人员在胃癌中发现了一些新的有希望的诊断及治疗靶点,但更多新的靶点仍需要我们去探索。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是指长度超过200 nt的非编码RNA。近些年大量的研究结果发现,lnc RNA在细胞中具有非常重要的调控功能,几乎参与到了各种生物学调控和通路中,lnc RNA与肿瘤间的相互作用更是国内外目前研究的重点,癌症中异常表达的lnc RNA常被认为是潜在的诊断生物标志物和治疗靶点。目前已有研究发现lnc RNA在胃癌中具有重要的生物学功能,但有关其更多的功能机制仍存在巨大的未知,急需我们进一步探讨。研究目的:得到胃癌及癌旁中具有差异表达的lnc RNA,分析其对患者预后的影响以及可能的相关机制通路,进一步挑选其中一个在胃癌中高表达、对患者预后具有不良影响的lnc RNA-LINC02407,深入研究LINC02407对胃癌的作用及机制。研究方法:1.提取肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库内的343例胃癌样本和30例癌旁对照组织样本数据,利用R语言包进行差异分析。2.提取样本的生存时间,对差异表达的lnc RNA进行单因素生存分析及COX回归分析。对差异表达的m RNA进行GO及KEGG功能富集分析。3.利用Lnc RNA数据库、UCSC Genome Brower及RNAfold在线工具对LINC02407进行基本特征分析;利用ORFfinder、UCSC Genome Brower分析LINC02407的开放式阅读框及密码子突变率,研究其编码能力。4.利用总RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR的方法检测LINC02407在胃癌组织及细胞中的相对含量。5.利用慢病毒、小干扰RNA技术构建LINC02407过表达、敲低及对照细胞实验分组模型。6.RNA荧光原位杂交技术检测LINC02407的亚细胞定位。7.通过CCK8细胞增殖实验、细胞凋亡实验及细胞划痕实验检测各实验分组模型的细胞生长、凋亡及迁移能力。8.构建裸鼠荷瘤模型,研究LINC02407对胃癌肿瘤的影响。9.生物信息学方法预测可能与LINC02407相结合的mi RNA,通过双荧光素酶活性实验进行检测。10.利用mi RNA mimics重新构建实验分组,研究相关mi RNA对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。11.再次利用生物信息学方法预测相关mi RNA的靶蛋白,western blot蛋白印迹杂交实验加以检测并确定。研究结果:1.从TCGA数据库中筛选得到了在胃癌中具有差异表达的lnc RNA及其可视化结果。胃癌中差异表达的lnc RNA进行了单因素Kaplan-Meier分析及多因素COX分析,发现COX回归模型中LINC01210为保护性lnc RNA,LINC01614、LINC01537、LINC02407、C15orf54、CYMP-AS1为危险性lnc RNA。2.对胃癌中具有差异表达的m RNA进行GO功能注释和KEGG pathway富集分析,发现其功能和机制可能与PI3K-Akt及MAPK等信号通路有关。3.发现胃癌中LINC02407差异表达及生存分析均有显著差异,且相关研究较少,选择LINC02407进行功能机制实验研究。4.LINC02407特征分析发现LINC02407位于chr12:76252275-76297735,长度为966nt,为一种正链非编码长链RNA。5.LINC02407在人胃癌组织及胃癌细胞中高表达。LINC02407可以促进胃癌细胞的增殖并增加侵袭性,抑制胃癌细胞的凋亡,同时还可以促进裸鼠中胃癌肿瘤的生长。6.生物信息学及双荧光素酶活性测试实验发现hsa-mi R-6845-5p及hsa-mi R-4455可以与LINC02407相结合。7.功能实验提示hsa-mi R-6845-5p及hsa-mi R-4455均可以抑制胃癌细胞的生长及侵袭性,促进凋亡。8.生物信息学的方法预测了hsa-mi R-6845-5p及hsa-mi R-4455的靶蛋白并进行了评分排序,western blot结果提示ADGRD1蛋白表达与hsa-mi R-6845-5p及hsa-mi R-4455均成负相关,即最终形成了LINC02407-mi R-6845-5p/mi R-4455-ADGRD1 ce RNA机制网络。研究结论:1.本研究首先利用TCGA数据库进行数据的挖掘分析,得到了胃癌中的lnc RNA差异表达谱,同时COX回归模型得知LINC01210、LINC01614、LINC01537、LINC02407、C15orf54及CYMP-AS1 6条lnc RNA具有较高诊断敏感性和特异性,其中LINC01210为保护性lnc RNA,其余均为危险性lnc RNA。2.LINC02407为一种正链lncRNA,在人胃癌组织及胃癌细胞中高表达。3.LINC02407可以促进胃癌细胞的生长及增加侵袭性,抑制胃癌细胞的凋亡,同时可以促进裸鼠中胃癌肿瘤的生长。4.LINC02407可以通过LINC02407-mi R-6845-5p/mi R-4455-ADGRD1ce RNA机制网络发挥其促癌作用,其进一步的机制可能与ADGRD1蛋白的表达激活了c AMP-PKA及c AMP-AKT/PI3K信号通路有关。5.LINC02407有望成为胃癌新型诊断及治疗靶点。