间质细胞外泌体miR--136在子宫内膜癌发生发展中的作用研究

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目的:本研究旨在探讨相对于正常组,子宫内膜癌间质细胞来源外泌体所携带的miRNA的差异性表达及miR-136在子宫内膜癌的增殖、转移、凋亡等相关肿瘤特性方面的作用。
  方法:
  1.收集3例子宫内膜癌组织和3例正常子宫内膜组织标本,分别进行体外分离并培养间质细胞,运用连续高速梯度离心法收集间质细胞分泌的外泌体。
  2.采用电镜、粒径方法及westernblotting对所提取的外泌体形态、粒径大小和蛋白标志物等进行鉴定。
  3.运用高通量测序测定外泌体内miRNA表达水平并进行GO(Gene ontology)注释和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析。
  4.采用生物信息学技术分析差异表达的miRNA的靶基因。
  5.使用miR-136mimics和antagomir处理子宫内膜癌上皮细胞(Ishikawa、HEC-1A),qRT-PCR检测miR-136表达水平。
  6.运用CCK-8、Transwell小室及流式细胞术检测Ishikawa、HEC-1A细胞的增殖、侵袭、转移及凋亡的情况。
  结果:
  1.成功分离并培养了正常子宫内膜及子宫内膜癌间质细胞,并提取出足量外泌体。
  2.子宫内膜癌间质细胞外泌体miRNA与正常组表达有明显差异。
  3.MiR-136在子宫内膜癌间质细胞源外泌体中下调最显著。
  4.MiR-136能促进子宫内膜癌肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,抑制凋亡。
  结论:子宫内膜癌与正常内膜间质细胞来源外泌体中miRNA表达谱具有显著差异。与正常内膜相比,子宫内膜癌间质细胞来源外泌体中miR-136表达水平明显降低,过表达miR-136可抑制子宫内膜癌上皮细胞增殖、转移及侵袭,促进细胞凋亡。
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