ILK两种多克隆抗体的制备及其初步应用

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zjubaoli
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整合素连接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)是一个具有Ser/Thr蛋白激酶活性的细胞内信号蛋白,它在许多肿瘤中都有过量表达,它的过量表达与肿瘤的形成和侵袭转移密切相关。还有文献报道ILK可能作为卵巢肿瘤早期筛查的生物标记。这些都显示对ILK的研究很有价值。我们实验室从事ILK的研究已多年,本研究的主要目的是尝试制备兔抗ILK多克隆抗体,以摸索出一条制备其抗体的途径,为相关的研究提供实验素材。 我们构建了表达ILK蛋白片段的pET32-ILK(1-1432)质粒,将此质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,并纯化蛋白,用纯化好的蛋白免疫新西兰大耳白兔,然后对抗血清进行了IgG的分离纯化,制备出了兔抗ILK重组蛋白的多克隆抗体;同时,委托专业公司合成ILK蛋白中的一段多肽,并与载体血蓝蛋白相连接,免疫新西兰大耳白兔,制备出兔抗ILK蛋白的多肽抗体,我们对抗血清进行了IgG的分离纯化,并做了效价分析。我们将兔抗ILK重组蛋白的多克隆抗体和它的多肽抗体进行了效价的比较分析,并应用所制备的两种抗体对实验室保存的患有卵巢肿瘤和宫颈肿瘤的病人的血清进行初步检测和分析。结果表明我们制备出的两种抗体有较好的效价和特异性,为ILK的研究提供了重要的实验素材。
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