【摘 要】
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蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)感染引起的一种非接触性传染病。该病被世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health)列为一种必须申报的烈性动物传染病。BTV主要感染羊、牛等反刍动物。BTV通过库蠓、伊蚊等昆虫在反刍动物之间传播。构成病毒外壳的VP2能够诱导机体产生中和抗体;VP5能够增强由VP2
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蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)感染引起的一种非接触性传染病。该病被世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health)列为一种必须申报的烈性动物传染病。BTV主要感染羊、牛等反刍动物。BTV通过库蠓、伊蚊等昆虫在反刍动物之间传播。构成病毒外壳的VP2能够诱导机体产生中和抗体;VP5能够增强由VP2刺激机体产生的中和抗体滴度,可以用于病毒样颗粒的装配和基因工程疫苗的研究。本研究利用原核表达系统表达了BTV1外壳蛋白VP5,又对其免疫原性进行研究,为进一步开展BTV VP5蛋白相关研究奠定了基础。通过构建原核重组质粒pET-28a-VP5,并转化BL21(DE3)感受态细胞。IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot结果表明,重组VP5蛋白分子量约为62kDa,与预期一致。进一步对诱导表达条件进行优化,结果表明用2×YT培养基、在IPTG浓度为0.4mmol/L、温度为25℃、诱导表达6h时重组蛋白可溶性表达量最高。纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置阴性对照。小鼠三免后ELISA检测产生抗体的效价,结果显示效价最高能达到1:2.048×10~5;Dot-ELISA结果显示VP5抗体能与BTV1病毒发生特异性反应。本研究不仅为分析VP5提高VP2的免疫保护效果的作用机制提供了重要的实验材料,并且为进一步研发多价亚单位疫苗和多肽疫苗奠定了基础。
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