氢生理盐水对大鼠肝大部切除后小肝综合征的保护作用及机制研究

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研究方法1.90%肝切除模型制备:根据Martins等方法进行改良。本实验中,乙醚麻醉,取上腹部正中切口,用丝线分别结扎肝左叶、中叶、右下叶及右上叶,并予90%肝切除,观察剩下的尾状叶无淤血后关腹。2.实验分组及处理:大鼠被随机分成三组:A组(n=60)、B组(n=40)、C组(n=40)。A组大鼠用于观察5天生存期,B和C组大鼠分别于术后2小时和24小时处死。根据不同的处理,A、B、C三组又分别分四个小组:A1、B1、C1(假手术),A2、B2、C2(90%肝切除+5ml/kg生理盐水),A3、B3、C3(90%肝切除+5ml/kg氢生理盐水),A4、B4、C4(90%肝切除+10ml/kg氢生理盐水)。术毕和术后每8小时,大鼠腹腔注射氢生理盐水(5或10ml/kg)或生理盐水(5ml/kg)。3.处死大鼠由下腔静脉取血5ml静置析取血清和液氮冰冻肝组织留待检测:全自动生化分析仪测定大鼠血清TBIL、DBIL、ALT、AST含量;通过特定的化学方法测定大鼠肝组织中的丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD);ELISA法测定大鼠肝组织中促炎因子TNF-a、 IL-6和HMGB-1的浓度;通过放射测量法测定血清中透明质酸(HA)的含量;大鼠肝组织病理切片H&E染色观察肝细胞损伤,以及CD31/PECAM-1抗体染色和NF-κB p65抗体染色分别观察内皮细胞的损伤和抗炎作用。实验结果1.90%肝切除后,对照组大鼠的5天生存期为20%,氢生理盐水组(HS,5mg/kg和10mg/kg)分别是53.3%和60%。这些数据表明HS可以明显延长肝大部切除后小肝综合征引起肝衰的大鼠生存期。2.90%大鼠肝切除后,血清TBIL、DBIL、ALT和AST显著升高,HS可以明显降低血清中TBIL、DBIL、ALT和AST的水平,减轻肝细胞的损伤;HS显著降低血清中透明质酸的含量,减轻内皮细胞的损伤。3. HS显著降低肝组织中的丙二醛(MDA)的含量和增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性,具有明显的抗氧化作用。4. HS显著的降低肝组织中的TNF-a、 IL-6和HMGB-1,具有明显的抗炎作用。5. NF-κB p65抗体染色显示,HS的抗炎抗氧化的作用可能与减少NF-κB的激活有关。结论氢生理盐水(HS)通过抗炎抗氧化的作用,可以预防肝大部切除后小肝综合征引起的肝功能衰竭,其机制可能与抑制NF-kB的激活有关。
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