目的:考察宣木瓜提取物的抗氧化活性及其活性成分的组成与分布,寻找宣木瓜提取物抗氧化活性的药效物质基础,筛选宣木瓜有效抗氧化活性部位。建立薄层色谱-生物自显影方法,快速表征宣木瓜提取物中具有抗氧化活性的成分。为中药抗氧化活性的相关研究提供较为简单、系统的方法与思路。方法:1建立抗氧化活性评价体系,考察宣木瓜提取物抗氧化活性存在部位本研究采用对自由基的清除和抑制脂质过氧化两方面来综合评价宣木瓜的抗氧化活性。通过DPPH·,ABTS+,O2-·,·OH的清除体系测定宣木瓜提取物对自由基的清除效果,以猪油过氧化体系为研究对象,采用测定过氧化值的国标法(GB/T5538-2005)-碘量法,研究了醇提物各极性萃取部位对猪油过氧化的抑制作用。2建立薄层色谱-生物自显影法检识抗氧化活性成分本研究采用基于DPPH及ABTS自由基清除的薄层色谱-生物自显影技术快速定性宣木瓜中抗氧化活性主要成分。考察了宣木瓜中酚酸系列及三萜酸系列的抗氧化成分。3采用Folin–Ciocalteu法和UPLC法测定主要抗氧化活性组分含量通过测定总多酚含量和宣木瓜醇提物各极性部位的活性成分的含量,探索含量与活性的相关性。4采用苯酚-浓硫酸法和HPSEC-MALLS-RI联用分析测定多糖的含量及组成通过测定多糖的含量及分子量和分子量分布情况,考察宣木瓜多糖的组成。5利用自由基清除法及体外刺激巨噬细胞考察宣木瓜多糖的活性通过测定宣木瓜多糖对自由基的清除能力,考察其抗氧化活性;体外刺激巨噬细胞,Griess法检测NO释放量,初步考察宣木瓜多糖的免疫活性。结果:1宣木瓜醇提物对自由基的清除作用强于其水提物。醇提物各极性萃取部位在DPPH·,ABTS+,O2-·,·OH评价体系中均具有很显著的清除作用,且随着各样品浓度的增加清除能力逐渐增强,其中乙酸乙酯萃取部位的IC50值显著低于其它各部位,对自由基的清除作用最强;在猪油过氧化体系中,乙酸乙酯萃取部位具有最强的抗氧化活性。2薄层色谱-生物自显影结果表明,宣木瓜醇提物各极性萃取部位及各级醇沉多糖对自由基均具有明显的清除作用;绿原酸及原儿茶酸等酚酸为宣木瓜中具有强抗氧化生物活性的成分。齐墩果酸、熊果酸等三萜酸在薄层色谱条件下未表现出清除自由基的作用。3测得宣木瓜醇提物不同极性萃取部位的总多酚含量及原儿茶酸与绿原酸的总含量高低顺序均为:乙酸乙酯部位﹥正丁醇部位﹥石油醚部位,各萃取部位清除DPPH·,ABTS+,O2-·,·OH自由基能力的强弱与总多酚含量及原儿茶酸与绿原酸的总含量高低趋势相一致。4 UPLC测定结果表明,在宣木瓜醇提物各极性萃取部位中乙酸乙酯部位是宣木瓜活性成分酚酸及三萜酸的主要存在部位。5本研究中HPSCE-MALLS-RI的测定结果显示,不同浓度醇沉得到的宣木瓜多糖在组成上没有明显差异,均含分子量约在7万、2万以下及小于1万的3种多糖;测得宣木瓜多糖的分子量分布指数(Mw/Mn)分别是1.336和1.639。6宣木瓜各级醇沉的多糖均具有清除·OH,O2-·,ABTS+自由基的作用,且清除能力随着各样品浓度的增加逐渐增强。在清除O2-·及·OH的评价体系中,95%醇沉多糖的清除能力最强,清除ABTS+的评价体系中,80%醇沉多糖对自由基的清除能力最强。本试验中宣木瓜多糖对巨噬细胞Raw264.7产生NO没有明显的促进作用。结论:宣木瓜醇提物和水提物均具有很好的抗氧化活性,清除自由基的能力随着宣木瓜样品浓度的增加逐渐增强。在宣木瓜醇提物各极性萃取部位中,乙酸乙酯萃取部位富含酚酸及三萜酸,且表现出了最强的抗氧化活性,可作为极具开发前景的新型天然有机抗氧化剂。绿原酸及原儿茶酸是宣木瓜中具有强抗氧化活性的成分,宣木瓜中的多酚类成分可能是宣木瓜发挥抗氧化作用的主要物质基础。分级醇沉得到的宣木瓜多糖在组成上没有明显差异,宣木瓜多糖的分子量均在10万以下,分子量分布的均一性较好。综合评价各级醇沉宣木瓜多糖的抗氧化活性,各级醇沉多糖的抗氧化活性相对较弱。本研究为中药抗氧化活性的相关研究提供了较为简单、系统的方法与思路。