SSR标记在甘蓝遗传多样性及杂种鉴定中的应用研究

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结球甘蓝简称甘蓝,起源于地中海沿岸和小亚细亚,在世界各地普遍种植。目前,在我国各地均有栽培,年栽培面积达到90万公顷左右,已成为我国重要蔬菜之一,在我国蔬菜全年供应中占有重要的地位。通过对甘蓝材料的生物学性状的调查和利用SSR标记对来自不同国家的60份甘蓝材料进行遗传多样性研究,有利于甘蓝种质资源的收集、鉴定、保存、创新和有效利用,探明甘蓝材料之间的亲缘关系、为亲本选配、新品种的选育提供可靠的理论依据。同时,利用SSR标记筛选共显性引物建立了西园四号甘蓝的纯度鉴定体系。主要研究结果如下:1.利用甘蓝的11个形态性状进行聚类分析,将60份甘蓝种质分为5大类。在遗传距离为0.89处,将两份尖头甘蓝材料单独划分出来,与其他材料存在明显的差别。从划分的类群来看,第1、3、4类的材料在形态上都具有较好的一致性,而第2、5类材料的一致性较小,甘蓝种质之间差异比较大。2.从95对SSR引物中筛选出的22对多态性引物对60份结球甘蓝材料基因组DNA进行PCR扩增,共扩增出92条清晰、可重复性条带,每对引物扩增条带数为2-6条。其中69条为具有多态性的条带,多态性百分率为75%。平均多态性条带为3.14。3.利用NTSYS计算60份甘蓝材料的相似系数,其相似系数在0.52~0.90之间。用UPGMA法生成系统聚类图,聚类表明在相似系数为0.58处,供试甘蓝材料聚为两类。第一类包括16份种质,为晚熟和极晚熟甘蓝。第二类包括44份种质,为极早、早、中熟甘蓝。这两类的划分结果与按成熟期划分结果基本相同。在相似系数0.70时划分为13类。从聚类图可看出,37份国内甘蓝材料划分比较集中,说明国内甘蓝材料的遗传距离小,遗传变异比较狭窄。23份国外甘蓝材料被划分在八个类别中,说明引进的国外种质资源的遗传多样性高,亲缘关系较远。为今后的亲本选配、新品种选育提供了有利的理论依据。4.通过比较形态学标记和SSR标记的聚类结果可看出,两种标记分类结果大部分是一致的。但他们之间也存有一定的差异。通过它们之间的比较,我们认为SSR标记比形态学标记更能准确进行甘蓝遗传多样性的研究。5.本研究从95对SSR引物筛选出条带清晰且双亲条带差异明显的引物0112-G04,多次重复,结果稳定,构建了西园四号及其亲本的DNA指纹图谱,并进行纯度鉴定,与田间鉴定结果一致,杂种纯度为96.7%,表明这对引物对西园四号甘蓝种子纯度鉴定是可行的。SSR标记与形态学相比,具有快速、省时省力、不受环境条件的影响等优点,因而比田间形态学鉴定更适于甘蓝的杂种纯度鉴定。
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