高灵敏荧光生物传感法检测水中双酚A和汞离子的研究

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随着人类生产与生活的发展,环境污染物对人类的危害逐渐显著,人们对污染物检测的精确度要求也日益提高,建立新的、灵敏度高的检测方法变得十分重要。本论文主要以增强检测信号和提高检测方法选择性为目标,基于不同的纳米材料研究了能提高检测方法的灵敏度的检测方法,并设计了几种新的检测方法,并将其应用于水溶液中BPA和Hg2+的检测。本论文包括的内容如下:(1)建立了一种高灵敏检测BPA的磁性分离荧光适配体传感器。首先,制备了 NH2-Fe3O4,然后通过氨基与羧基的温和化学反应,与带有羧基的捕获探针通过肽键连接,获得DNA-纳米粒子复合物。再加入AHN标记的适配体,适配体可以通过碱基互补配对与捕获探针形成双螺旋结构。在BPA存在下,AHN标记的适配体更倾向于与BPA特异性结合,导致BPA适配体从双螺旋结构中释放并包裹BPA。这个过程中关键的是,适配体与BPA特异性亲和力强于与捕获探针结合的能力。在没有BPA的情况下,AHN标记的适配体仍然与捕获探针杂交,磁性分离后的上清液中不能检测到荧光信号。在最佳优化条件下,方法的检测限达到0.047 ng/mL。该方法有效地降低了其他物质的干扰,具有良好的选择性,并且能运用于实际水样的检测。(2)将两个芘分子分别标记在竞争链的3’和5’端,竞争链是根据BPA适配体设计的具有发夹结构的寡核苷酸。在没有BPA的情况下,竞争链与BPA适配体互补杂交,使得链两端的两个芘分子彼此远离,芘分子发射单体荧光。在BPA存在时,由于适配体更倾向于与BPA特异性结合,使得适配体与竞争链分离。与适配体分离的竞争链又自动恢复了原有的发夹结构,两端的芘分子彼此靠近形成激基缔合物并发射出缔合物荧光。该方法的检测限为0.094ng/mL,操作简单,选择性好,能用于实际水样中对BPA的检测。(3)基于两个重要的原理设计了一种检测水中Hg2+的传感器:1)磁性氧化石墨烯可以吸附ssDNA,且其对有机荧光染料具有强烈淬灭效应;2)两种富含胸腺嘧啶的探针可在Hg2+存在下形成比沃森克里克碱基配对“A-T”更稳定的T-Hg2+-T结构。当ssDNA*完全吸附在MGO表面时,AHN荧光被有效猝灭。加入捕获探针和Hg2+,给予足够的时间进行错配杂交,5’-端形成了 T-Hg2+-T结构,随后进行磁性富集,除去原溶液,加入一定体积的释放探针(通过改变最终体系中溶液的体积来控制不同的富集因子),让其与3’端依然吸附在MGO上的ssDNA*杂交。使得ssDNA*完全分离MGO。最后,荧光得到恢复。在本方法中,由于利用了磁性富集分离的方法,使该方法灵敏度高,检测限达到0.65 nmol/L,而且该方法选择性好,抗干扰能力强。能有效地运用到实际水样的检测中。
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