出口果园中库尔勒香梨黑斑病快速检测及疫情监测技术研究

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本文对新疆出口果园中库尔勒香梨黑斑病菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissl)生物学特性和PCR检测方法进行了研究,建立了该病菌实时荧光PCR检测方法。通过对出口果园中香梨黑斑病疫情监测,明确了病害发生期和发病严重度与果园孢子量和气象因素等之间的关系,掌握了香梨黑斑病在当地的发生规律。对不同培养条件下香梨黑斑病菌的生长特性进行研究,以期明确该病菌的生物学特性。在不同培养条件(包括培养基、碳源、氮源、温度、酸碱度、光照条件)下,培养香梨黑斑病菌7d,测量其菌落直径大小,观察其菌丝及分生孢子生长状况,用SPSS18.0软件对相关数据进行统计分析。结果表明,香梨黑斑病菌在PSA、PCA培养基上生长较好,在理查氏培养基上生长较慢。最佳碳源为可溶性淀粉和蔗糖;能够充分利用蛋白胨;在15℃~35℃温度范围内均能生长,最适生长温度为25℃~30℃。在pH为4.5~9.0之间均生长,最适pH5.0~8.0。在全光照培养条件下有利于菌丝的生长,在全黑暗条件下,有利于分生孢子的产生。采用真菌通用引物ITS1/ITS4对香梨黑斑病菌进行PCR扩增,将扩增产物进行克隆、酶切分析和测序,用DNAMAN软件分别设计出了检测该病菌的特异性引物XJAF、XJAR和TaqMan探针XJAP,建立了该病菌实时荧光PCR检测方法,通过体系优化和检测结果显示,该方法可以用于香梨黑斑病的检测。香梨生长季节,在出口果园放置真菌孢子捕捉器,捕捉A.alternata的分生孢子,同时采集花和果实,进行镜检、分离培养和PCR检测鉴定。结合当地气象因子及香梨黑斑病菌监测和病原菌鉴定结果,探索该病害的发生规律。果园中A.alternata分生孢子的数量变化有较明显的规律性;花期病菌孢子数量较少,从果实膨大期至果实成熟期,病菌孢子数量增速较快,果实采摘期病菌孢子量达到最大。果园病菌孢子量的多少与温湿度有关,气温在28℃左右以及相对湿度在60%左右时病菌孢子数量达到最大。A.alternata从花期开始侵染香梨,在果实生长期至成熟期繁殖扩散。从结果期开始发病,并逐渐严重,果实采摘期发病最重。通过在出口果园不同时期捕捉A.alternata孢子,并对花和果实中的该病菌进行检测,查明了该病菌分生孢子在果园中的消长过程,明确了病害发生期和发病严重度与果园孢子量和气象因素等之间的关系,掌握了香梨黑斑病在当地的发生规律。
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