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背景：卵巢恶性肿瘤是最常见的女性恶性肿瘤之一,也是死亡率最高的妇科恶性疾病。具有发病隐匿、进展迅速的特点,由于缺少高敏感度和特异性的早期诊断方法,约80%的患者发现时已成为晚期。目前,卵巢上皮性癌的治疗模式为肿瘤细胞减灭术,术后给予以铂类为主的联合化疗,但5年生存率仍徘徊在35%左右。70%卵巢癌患者的5年内死因是肿瘤盆腹腔复发,其主要原因是铂类耐药而导致治疗失败。目前认为耐药机理有多种,但具体为什么途径耐药还有待进一步研究。据国外相关报道,WWOX与P73相互作用能增强凋亡,我们考虑这种相互作用是否与卵巢癌的铂类药物敏感性有关。但二者的作用机理尚不清楚,因此我们研究WWOX与P73a基因的相互作用机理,望能分析解决卵巢癌铂类耐药的途径,恢复卵巢癌铂类药物的敏感性。目的：构建及鉴定WWOX、P73a基因慢病毒载体,观察WWOX和P73a基因在人卵巢癌PEO1细胞株中的表达,为进一步研究WWOX与P73a基因的相互作用机制及其功能奠定基础。方法：1.采用PCR技术从克隆质粒模板中获得全长WWOX与P73a基因,将WWOX与P73a基因亚克隆到慢病毒载体PCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP中,构建慢病毒载体表达质粒WWOX-PCDH及P73a-PCDH。2.通过双酶切验证后,慢病：毒表达质粒与慢病毒包装质粒pPACKH1-GAG, pPACKH1-REV, Pvsv-G共转染人293T细胞,获得携带WWOX,P73a基因及EGFP基因的重组慢病毒Lenti WWOX和Lenti P73a。3.转染靶细胞人卵巢癌PEO1细胞株。通过RT-PCR和Western Blot验证Lenti wwox及Lenti P73a在人卵巢癌细胞PEO1中的表达。结果：1.测序结果显示成功构建重组慢病毒载体表达质粒PCDH-WWOX、PCDH-P73a。2.表达质粒与辅助包装质粒共转染包装细胞293T后能产生慢病毒颗粒并有效感染靶细胞PEO1,转导效率约为60%。3.经RT-PCR和Western Blot验证,被感染的PEO1细胞有WWOX与P73a基因mRNA和蛋白水平的高表达。结论：本实验成功构建了携带WWOX与P73a基因慢病毒表达载体,包装成病毒后能有效感染卵巢癌PEO1细胞。