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目的:通过超速离心法分离出急性期川崎病患儿血清中的外泌体,进一步通过微阵列芯片技术筛选得到川崎病(Kawasaki disease,KD)急性期患儿血清中有差异表达的外泌体源性微小RNA(microRNA,miRNA),分析得到与血管炎症相关的miRNAs,以探究川崎病的可能发病机制方法:1.选取12例于2019年03月至08月在苏州大学附属儿童医院就诊,并明确诊断为川崎病急性期的患儿为研究对象,且这些患儿都是在大剂量丙球及阿司匹林使用前,将他们随机分成3组,并选取了同期健康体检儿童12例,均留取清晨空腹血,通过超速离心法分离血清中外泌体,并通过透镜观察分离得到的外泌体形态,进一步从外泌体中获得miRNAs,采用芯片杂交技术筛选出川崎病急性期组与正常对照组中差异表达的外泌体源性miRNAs。2.再次选取同期就诊KD急性期6例患儿及健康儿童6例作为研究对象,利用实时定量 PCR(real-time quantitative PCR,RTqPCR)技术验证芯片结果。利用 TargetScan、miRDB、miRWalk三个数据库对差异表达的外泌体源性miRNAs进行靶基因预测,使用生物信息学分析软件对共同的靶基因进行分析,寻找与KD炎症性血管损伤相关的可能靶基因。结果:1.超速离心法所得的粒子在透射电镜下检测显示,粒子直径为100nm,且形态完整、球形、大小均一,证实分离所得粒子即为外泌体(exosomes)。2.KD患儿急性期外泌体源性miRNAs中,芯片筛选出了 33个有差异性表达miRNAs,其中有9个已被命名的miRNAs,6个表现为下调水平(hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-130b-5p、hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-151a-5p、hsa-miR-370-3p),3 个表现为上调水平(hsa-miR-122-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-4484)(p 值<0.05,fc 值>1.5)。RTqPCR 结果显示hsa-miR-122a-5p、hsa-miR-21-5p 相对表达量显著性上调,hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-150-5P显著下调,与芯片结果一致。3.将 hsa-miR-122a-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-125a-5p、has-miR-150-5p 利用生物分析软件得到各自的共同靶基因,对靶基因进一步分析及查阅相关文献,分别定位下游的与血管炎相关的可能靶基因,分别是:DDAH1/OLR1、TFDP2/PEG10/CBL、TNFAIP3/SMURF1、PRKCA。结论:1.利用超速离心法能够有效分离提取血清中外泌体。2.芯片技术与RTqPCR技术结合运用,发现KD患儿急性期血清中的外泌体源性的miRNAs是有差异性表达。川崎病血清中的外泌体可能是通过其携带的miRNAs参与了川崎病血管炎的发生发展。