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【背景】脑胶质瘤是最常见的脑肿瘤,致死率多年来居高不下。融合基因由两个染色体基因重排形成。在血液系统肿瘤和实体肿瘤中已经发现了许多促进肿瘤发生发展的融合基因。转录本测序目前已成为发现和检验肿瘤中融合基因的非常重要的工具。已经有许多融合基因都是通过转录本测序这一工具被发现。第一个通过转录本测序发现并鉴定出来的脑胶质瘤融合基因是FGFR3-TACC3融合基因。FGFR3-TACC3融合基因定位于细胞有丝分裂纺锤体极,有激酶活性,延迟细胞的有丝分裂和染色体分离过程,同时促进非整倍体的形成。EGFR-PSPH14融合基因能促进胶质瘤细胞的更新和生长,活化STAT3通路,并对EGFR的抑制剂敏感。应用转录本测序的方法检测CGGA数据库中部分胶质瘤样本,目前已经发现了不少融合基因,其中PTPRZ1-MET融合基因在继发胶质母细胞瘤中发现并证实。同时CGGA转录本测序还发现了2例PTEN-COL17A1融合基因和4例EGFR-RP11-745C15.2融合基因的病例,尚未经行验证研究。【方法】PCR方法扩增待测样本的融合位点序列,阳性PCR产物进行焦磷酸测序,用PCR和测序方法验证CGGA转录本测序发现的PTEN-COL17A1融合基因和EGFR-RP11-745C15.2阳性样本,同样的方法在另外40例独立样本中验证。用Western blot方法检测PTEN-COL17A1融合基因对蛋白表达影响情况,发现转录本测序PTEN-COL17A1融合基因阳性的样本中野生型Collagen XVII表达升高。体外实验,应用si RNA干扰方法降低U251细胞的COL17A1表达,在H4和U87中过表达COL17A1。通过CCK8增殖和克隆形成实验观察敲低和过表达COL17A1后细胞的增殖能力,通过迁移和侵袭实验观察敲低和过表达COL17A1后细胞的迁移和侵袭能力。通过Overlap PCR方法克隆EGFR-RP11-745C15.2融合基因全长,构建质粒,在U87细胞系中过表达EGFR-RP11-745C15.2,进行功能研究。【结果】用PCR和焦磷酸测序方法证实了CGGA转录本测序发现的1例PTEN-COL17A1和2例EGFR-RP11-745C15.2融合基因真实存在。同时发现并证实了4例新的EGFR-RP11-745C15.2融合基因病例,且都在较高级别胶质瘤中。发现了转录本测序PTEN-COL17A1融合基因阳性的样本中野生型Collagen XVII表达升高。应用si RNA干扰方法降低U251细胞中COL17A1表达,随着Collagen XVII表达降低MMP9蛋白表达也随之减低,细胞侵袭能力明显降低。在H4和U87细胞中过表达COL17A1,Collagen XVII升高后MMP9蛋白表达也随之升高,细胞侵袭能力明显增强。Overlap PCR方法成功克隆R-RP11-745C15.2融合基因全长,成功构建质粒,在U87细胞系中观察到了EGFR-RP11-745C15.2融合基因过表达以后抑制肿瘤的迁移和增殖,促进凋亡。【结论】本研究证实了PTEN-COL17A1和EGFR-RP11-745C15.2融合基因真实存在,同时发现4例新的EGFR-RP11-745C15.2融合基因病例,且都在高级别胶质瘤中。EGFR-RP11-745C15.2融合基因可能与高级别胶质瘤尤其是WHOⅣ胶质母细胞瘤密切相关。发现了转录本测序PTEN-COL17A1融合基因阳性的样本中野生型Collagen XVII表达升高。证实了COL17A1通过调节MMP9增加胶质瘤细胞的侵袭能力。EGFR-RP11-745C15.2融合基因可能抑制肿瘤的迁移和增殖,促进凋亡。