Ad-nm23-H1的构建与鉴定及其对A375细胞增殖的影响

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[目的]:构建含人肿瘤转移抑制基因nm23-Hl的复制缺陷型重组腺病毒载体,观察其对人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞株体外生长抑制情况。 [方法]:通过同源重组方法构建含nm23-Hl基因的缺陷型重组腺病毒载体Ad-nm23-Hl,并进行PCR鉴定及病毒滴度测定。用报告基因AD-GFP检测腺病毒对恶性黑色素瘤细胞株A375的转染效率:MTT法观察nm23-Hl对恶性黑色素瘤细胞株A375细胞株体外增殖的影响。 [结果]:PCR,酶切鉴定及测序结果证实pShuttleCMV-nm23-Hl及Ad-nm23-Hl质粒正确构建,收获病毒后的PCR鉴定及DNA测序结果证明Ad-nm23-H1包被成功。重组腺病毒Ad-nm23-H l滴度为3×10<11> PFU/ml。Ad-nm23-H1对A375细胞有较高的转染效率。体外试验示,Ad-nm23-H l转染的肿瘤细胞增殖受到明显的抑制。 [结论]:成功构建了重组腺病毒载体Ad-nm23-H1。重组腺病毒介导nm23-Hl表达能有效抑制人恶性黑色素瘤A375细胞在体外的增殖,为进一步认识和研究nm23-Hl抑制肿瘤转移分子机制奠定了基础。
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