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硒是人体必需的微量元素,是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的重要组成部分,缺硒会造成GPX活性较低,从而导致各种疾病。因此安全有效的补硒剂的研究与开发是当前研究的重要课题之一。硒的存在形式有无机硒和有机硒两种,但无机硒毒性较大,而有机硒在安全性、生物活性及生物利用度等方面都优于无机硒。姬松茸(Agaricus blazei)是一种珍贵的药、食两用真菌。它不但味道鲜美,脆爽可口,而且其子实体中含有大量的多糖、蛋白、凝集素、甾醇类、脂质、维生素和微量元素硒等具有医疗保健作用的有效成分,已成为21世纪功能性食品的“新宠”。目前国内外对姬松茸多糖、甾醇、多酚、活性肽研究较多,而对姬松茸中微量元素硒的研究少。因此研究硒在姬松茸子实体内的存在形式及其分布,为有机硒功能食品和药物的研究开发提供科学依据,具有重要的理论研究意义和应用价值。本文主要研究内容如下：1、建立了姬松茸子实体中硒含量的氢化物-原子荧光光谱测定方法。用硒标准溶液考察了灯电流、负高压、载流盐酸体积分数、硼氢化钠质量分数和酸介质浓度对荧光强度的影响,最佳实验条件为灯电流80mA、负高压270V、载流盐酸体积分数10%、硼氢化钠质量浓度0.9%和酸介质浓度2.4 mol/L。该法线性范围为1-10ng/mL,检出限为0.002ng/mL,精密度为1.32%-4.11%(n=10),回收率为92.89%-106.49%(n=5)。使用湿法消解和高压微波消解姬松茸样品后,用氢化物原子荧光测定姬松茸子实体中总硒含量分别为1.243±0.03441μg/g和1.304±0.0387μg/g, RSD分别为2.76%和2.97%,结果表明两种消解方法测定姬松茸子实体中硒含量相近,且精密度好、准确度高、操作简便、成本低,皆可用于姬松茸子实体中硒含量的测定。2、研究姬松茸中硒的形态及分布。采用透析法去除无机硒,用不同提取方法得到硒核酸、硒多糖、总可溶性硒蛋白、水溶性硒蛋白、盐溶性硒蛋白、醇溶性硒蛋白、碱溶性硒蛋白,然后用氢化物原子荧光测定其硒含量。结果表明,在姬松茸子实体中81.57%的硒是以有机硒的形式存在,各形态有机硒分布为硒蛋白>硒多糖>硒核酸,蛋白结合的硒最高,占有机硒的73.53%,总硒的60.15%,硒多糖其次,占有机硒的12.23%,总硒的9.98%,因此硒蛋白是姬松茸子实体中硒的主要赋存形式。硒在蛋白中分布为碱溶性蛋白>水溶性蛋白>盐溶性蛋白>醇溶性蛋白,其中碱溶性蛋白和水溶性蛋白是结合硒的主要蛋白,分别占硒蛋白的74.99%和10.28%,占有机硒的55.15%和7.56%,占总硒的45.11%和6.17%。3、姬松茸硒多糖的分离纯化及结构表征。研究姬松茸多糖的分离纯化,测定了硒多糖组分的分子量及硒含量,并分析了其单糖组成。采用水提醇沉法提取姬松茸多糖,经三氯乙酸脱蛋白,DEAE-52纤维素柱分离纯化得到3个多糖组分,分别为水洗脱组分AB-SeP-1,0.05mol/LNaCl洗脱组分AB-SeP-2和0.1mol/LNaCl洗脱组分AB-SeP-3。采用高效液相色谱测定其分子量,原子荧光测定其硒含量,气相色谱法测定其单糖的组成。结果表明,姬松茸子实体多糖得率为12.06%,多糖含量为32.51%；AB-SeP-1和AB-SeP-3均为均一硒多糖组分,分子量分别为3075和111074,硒含量分别为1.911μg/g和0.671μg/g；AB-SeP-2主要由分子量为21254和34778的多糖组成,硒含量为0.613μg/g；AB-SeP-1由半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比为半乳糖：葡萄糖=1：7.49;AB-SeP-2由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比为甘露糖：半乳糖：葡萄糖=1:1.55:27.01; AB-SeP-3由半乳糖、甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比为半乳糖：甘露糖：葡萄糖=1：1.22.9.81。4、姬松茸硒蛋白的分离纯化及形态分析。研究了姬松茸硒蛋白的分离纯化,测定了硒蛋白组分的硒含量及亚基组成。采用不同溶剂提取得到四种姬松茸硒蛋白,运用DEAE-52纤维素和Sephadex G-100对姬松茸水溶性蛋白和碱溶性蛋白进行分离纯化,各得2个硒蛋白组分,Native-PAGE鉴定其纯度,SDS-PAGE测定姬松茸硒蛋白组分亚基的分子量。结果表明,姬松茸水溶性蛋白得率和含量分别为5.01%和15.90%；盐溶性蛋白得率和含量分别为0.33%和13.34%；醇溶性蛋白得率和含量分别为0.41%和21.31%；碱溶性蛋白得率和含量分别为27.51%和28.63%。姬松茸水溶性硒蛋白AB-SePA-22为单一硒蛋白,由分子量为16.7kDa,21.7kDa,26.3kDa和33.6kDa四个亚基组成,而碱溶性硒蛋白AB-SePG-22电泳条带不清晰,出现严重的拖尾现象。姬松茸硒蛋白组分AB-SePA-22、AB-SePG-22硒含量分别为4.935μg/g和6.0831μg/g。