siRNA沉默Trop2基因表达对胃癌BGC823细胞迁移侵袭能力的影响

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目的:构建在哺乳动物细胞中表达Trop2的重组质粒并作用于胃癌BGC823细胞株,探讨重组质粒对BGC823细胞株Trop2 mRNA及蛋白的抑制作用,以及对胃癌BGC823细胞迁移侵袭能力的影响。方法:根据GenBank数据库提供的Trop2基因核苷酸序列设计三条多聚核苷酸序列,构建三条干扰重组质粒pGenesill.1-Trop21、pGenesill.1-Trop22、pGenesill.1-Trop23;在脂质体的介导下瞬时转染入人胃癌BGC823细胞株,优化转染条件,荧光倒置显微镜下观察转染效率;用实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, QRT-PCR)和Western blot分析Trop2 mRNA,及蛋白的表达;Transwell小室实验测定干扰重组质粒对BGC823细胞株的的迁移侵袭能力的影响。结果:(1)酶切鉴定和DNA测序分析显示,Trop2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。(2)细胞转染条件的优化及转染效率的观察:当所构建重组质粒与脂质体的质量体积比为1:4转染时,转染效率最高达75%。(3) QRT-PCR及Western blot的结果:干扰重组质粒均能使胃癌BGC823细胞株中Trop2 mRNA及蛋白的表达下调。pGenesill.1-Trop21组、pGenesill.1-Trop22组、pGenesill.1-Trop23组对Trop2 mRNA抑制率分别为23.9%、23.7%、29.9%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Trop2蛋白抑制率达分别为32.8%、25.5%、62.0%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。筛选得到pGenesill.1-Trop23作为最佳干扰效果质粒进行后续实验。(4)迁移侵袭实验结果:体外迁移实验示pGenesill.1-Trop23作用BGC823细胞株48小时后,穿过Matrigel膜的细胞个数为(43±6)个,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。体外侵袭实验示pGenesill.1-Trop23作用BGC823细胞株48小时后,穿过Matrigel膜的细胞个数为(23±5)个,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论:干扰重组质粒pGenesill.1-Trop21、pGenesill.1-Trop22、pGenesill.1-Trop23均能有效抑制人胃癌BGC823细胞株Trop2 mRNA和蛋白的表达,最佳干扰质粒pGenesill.1-Trop23能降低人胃癌细胞的迁移侵袭力,为进一步研究以Trop2为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。
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