药物通过代谢一般生成高极性、低毒性的产物以排出体外,但也有部分药物在代谢过程中会产生一类具有化学反应活性的中间体,这类物质易与生物大分子蛋白、核酸等共价结合导致肝脏损伤、机体过敏等药物不良反应。反应性代谢物因其高反应性、低稳定性以及低含量的特点,通常采用捕获试剂与之生成稳定加合物后进行检测。目前已有报道采用谷胱甘肽及其衍生物作为捕获剂,并采用液相色谱-质谱联用的检测方法,但仍存在捕获范围窄、检测灵敏度低及不便质谱解析等特点,因此探索一种新型高效的捕获试剂和质谱探针,对新药早期药代筛选、药物不良反应发生机制等研究具重要的方法学意义。基于捕获官能团(主要为氨基和巯基)的反应特性,本文以氨基酸为结构单元,设计、合成与优化一系列的寡肽探针和质谱标签,并对其捕获效率和质谱行为进行了功能验证。主要的研究工作如下:1、综合考察了氨基酸构型、肽键连接位点、氨基酸序列、末端残基种类等寡肽结构因素,设计、合成了系列用于捕获并检测反应性代谢产物的寡肽探针,采用液相色谱、质谱技术对其结构进行系统表征,进一步探讨了寡肽探针的质谱裂解规律。2、建立了检测寡肽探针与对乙酰氨基酚的反应性代谢产物NAPQI的加合物的液相色谱-串联质谱多反应监测分析方法,以此考察各寡肽探针的捕获性能和质谱裂解行为,最终筛选出L-构型氨基酸、肽键为α连接位点的WCK作为捕获反应性代谢产物的寡肽探针。3、选取了甲灭酸、呋喃、雌二醇等六种代表性药物底物,采用肝微粒体体外药物代谢反应体系,充分运用质谱的中性丢失扫描、增强子离子扫描、多反应监测等检测模式,对WCK捕获反应性代谢产物的有效性进行了功能验证。根据反应性产物加合物的质谱裂解规律,建立了一种高选择性、高灵敏度和通用表征药物代谢活化的新方法,并成功应用于不同结构药物反应性代谢产物的质谱鉴别。