背景和目的 近视眼是目前全球发生率最高的屈光不正，且有不断增强的流行趋势，已经成为严重的公共卫生问题。世界卫生组织(WHO)已将近视眼的防治列为全球防盲计划之一。高度近视又称病理性近视或变性近视，约占原发近视的3％～6％。其病理机制至今不明。但形觉剥夺理论认为形觉剥夺主要通过局部视网膜机制来调控邻近巩膜的生长，视网膜含有多种神经递质，形觉剥夺可以导致神经递质水平发生改变，参与调控形觉剥夺性近视(form deprivation myopia，FDM)的形成。 神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的发现已经有五十年的历史。其主要通过受体，TrkA和P75，兼有调控神经元和非神经元的分化增殖和维持其功能的双重作用。NGF不仅产生和表达于视网膜，维持三级神经元的塑形和功能建立，又与现已证实的多种控制FDM发生的生物物质之间相互作用，而且也产生和表达于软骨细胞，可能促进其分裂增生。Nastri G(1998)将抗鼠NGF免疫血清通过局部点眼的方式阻止了鸡近视的发展，提出了NGF可能参与近视形成的推测。但长期以来未见对其机制研究的报道。 本实验从蛋白和分子水平研究了FDM形成过程中，NGF在视网膜和巩膜细胞郑州大学2004届硕士毕业论文摘要中的变化规律，以探讨NGF与FDM发生和发展的关系.材料和方法 选用健康雄性海兰鸡雏30只，随机分为3组，每组10只。实验前对鸡进行检影验光，排除先天性近视。于出生后第二天将右眼以半透明眼罩遮盖作为遮盖眼，左眼开放作为对照眼。分别遮盖3天、1周和2周。最后随即选取每组6只。去除眼罩，暗室验光，确定剥夺眼及对照眼的光状态。处死，迅速取出眼球，剪除眼球周围软组织，用游标卡尺测量眼轴长。固定、脱水、二甲苯透明和石蜡包埋。所有腊块连续切片，4um厚共4张，6um厚共4张。常规HE染色、免疫组织化学染色和原位杂交染色，油镜下在视网膜的后极部取6个视野，分别计算节细胞层和巩膜软骨层的阳性细胞百分比数及内核层每视野中阳性细胞个数，求得平均值。结果 (l)遮盖眼的眼轴较对照眼明显增长，随遮盖时间的延长明显增长(尸<0.001)。眼轴的增长与负性屈光度的增加之间存在明显正相关(齐0.983)。 ( 2) HE染色显示:遮盖眼巩膜的形态学变化主要集中于后极部，赤道部变化最不明显。软骨层增厚，双极细胞增多，软骨细胞绝对数目上升，但密度下降。遮盖眼视网膜内丛状层、内核层变薄。 (3)免疫组化染色显示:NGF蛋白主要表达于视网膜节细胞、内核层细胞、内丛状层和巩膜软骨细胞(尤其双核细胞)，胞浆呈棕褐色颗粒状着色。形觉剥夺使鸡遮盖眼较对照眼阳性细胞率(数)明显增加，但是随着时间的延长对照眼和遮盖眼中阳性细胞率(数)不断显著下降。鸡遮盖眼眼轴长(y)与内核层阳性细胞数(x、)、节细胞阳性率(xZ)和巩膜细胞阳性率(x3)与之间存在线性关系，其多元线性回归方程为y二17.621一0.583x厂0.236x2一0.222x3。其中，遮盖眼 内核层阳性细胞数(标化回归系数=一0.583)与眼轴长之间关系最为密切。 (4)原位杂交显示:NGF mRNA主要表达于视网膜节细胞、内核层细胞、 内丛状层和巩膜软骨细胞(尤其双核细胞)，胞浆呈棕褐色颗粒状着色。形觉剥 夺使鸡遮盖眼较对照眼阳性细胞率(数)明显增加，但是随着时间的延长对照眼 和遮盖眼中阳性细胞率(数)不断显著下降。 (5)鸡遮盖眼视网膜和巩膜中表达NGF蛋白的阳性细胞数与表达郑州大学20C.4届硕士毕业论文摘要NGF赦NA的阳性细胞数之间存在正相关，即形觉剥夺引起视网膜中NGF的增加，主要来源于细胞的自分泌。其中，内核层细胞最明显(r=0 .900)，其次是巩膜软骨细胞(r=0 .762)和节细胞(厂=0 .638)。结论 (l)雏鸡形觉剥夺能产生明显近视，且随遮盖时间的延长近视程度不断加深。 (2)形觉剥夺可造成雏鸡的视网膜结构发生改变，可看作是视网膜发育的一种损伤因素。形觉剥夺性近视的形成是鸡软骨巩膜主动塑形的结果。 (3)雏鸡视网膜节细胞和内核层细胞可以自分泌的形式产生和获得神经生长因子，促进其本身及内丛状层的功能和形态的建立。但随着年龄的增加，这些细胞功能和形态日渐成熟，对NGF的依赖性也逐渐下降。形觉剥夺可使这种对NGF的依赖性维持更长的时间。 (4)视网膜节细胞参与了FDM的形成。 (5)软骨细胞可以自分泌的形式产生和获得NGF以促进自身的分裂增殖。 (6)NGF参与了FDM的形成。尽管FDM形成过程中，雏鸡视网膜自分泌NGF的绝对量增多，但对于形觉剥夺情况下视网膜功能和形态的建立又是相对不足的。