论文部分内容阅读
目的:通过检测控制性超促排卵（controlled ovarian hyperstimulation,COH）周期中多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白-3（GOLPH3）与凋亡相关因子（BCL-2、BAX、Caspase-3）的表达,初步探讨PCOS患者GOLPH3的表达异常对颗粒细胞凋亡和卵母细胞质量的影响,为改善PCOS患者助孕妊娠结局提供理论依据。方法:选择2016年5月至2017年5月在福建省妇幼保健院辅助生殖技术研究室因输卵管不孕因素首次行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕的PCOS患者78例和同期非PCOS患者78例（对照组）为研究对象,收集颗粒细胞。应用免疫细胞化学（immunocytochemistry,ICC）和蛋白质印迹（Western blotting,WB）方法检测颗粒细胞GOLPH3、BCL-2、BAX、Caspase-3蛋白的表达,应用Real-time RT-PCR技术检测颗粒细胞GOLPH3、BCL-2、BAX、Caspase-3 mRNA的表达。运用统计学方法分析数据,比较两组GOLPH3和凋亡相关因子的表达差异,应用Pearson相关分析、多元线性回归分析GOLPH3表达与颗粒细胞凋亡及超促排卵结局的关系,应用ROC曲线评价GOLPH3预测临床妊娠的价值。结果:1、两组在年龄、不孕年限、基础FSH、基础PRL、基础E2水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。PCOS组的BMI、窦卵泡数（AFC）、基础LH、基础T、血清抗苗勒管激素（AMH）水平均高于对照组（P<0.05）。经预处理后两组LH、T水平差异无统计学意义（P>0.05）。PCOS组平均获卵数、取消移植率均高于对照组（P<0.01）,获卵率、受精率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率均低于对照组（P>0.05）,早期流产率高于对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）。2、GOLPH3蛋白和凋亡相关蛋白（BCL-2、BAX、Caspase-3蛋白）在两组卵巢颗粒细胞胞质中呈阳性表达。与对照组相比,PCOS组GOLPH3蛋白表达水平、GOLPH3 mRNA表达水平均低于对照组（P<0.05）,抗凋亡蛋白BCL-2表达水平、BCL-2 mRNA表达水平均低于对照组（P<0.05）,PCOS组促凋亡蛋白BAX、凋亡效应蛋白Caspase-3表达水平和BAX mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平均高于对照组（P<0.05）。3、新鲜胚胎移植周期PCOS组临床妊娠12例、未妊娠13例。PCOS组临床妊娠亚组GOLPH3蛋白、抗凋亡蛋白BCL-2表达水平和GOLPH3 mRNA、BCL-2mRNA表达水平均高于未妊娠亚组（P<0.05）,促凋亡蛋白BAX、凋亡效应蛋白Caspase-3表达水平和BAX mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平均低于未妊娠亚组（P<0.05）。新鲜胚胎移植周期对照组临床妊娠23例、未妊娠22例。对照组临床妊娠亚组GOLPH3蛋白、BCL-2蛋白表达水平和GOLPH3 mRNA、BCL-2 mRNA表达水平均高于未妊娠亚组（P<0.05）,BAX蛋白、Caspase-3蛋白表达水平和BAX mRNA、Caspase-3 mRNA表达水平均低于未妊娠亚组（P<0.05）。PCOS组临床妊娠亚组GOLPH3蛋白、GOLPH3 mRNA表达水平低于对照组临床妊娠亚组（P>0.05）,PCOS组未妊娠亚组GOLPH3蛋白、GOLPH3 mRNA表达水平低于对照组未妊娠亚组（P<0.05）。4、Pearson相关分析结果显示GOLPH3蛋白、GOLPH3 mRNA表达水平与受精数、卵裂数、优质胚胎数、冷冻胚胎数呈正相关（P<0.05）;GOLPH3蛋白与抗凋亡蛋白BCL-2呈正相关（P<0.001）,与促凋亡蛋白BAX、凋亡效应蛋白Caspase-3呈负相关（P<0.001）。多元线性回归分析提示颗粒细胞GOLPH3蛋白表达水平与优质胚胎数呈正相关（P<0.001）。采用ROC曲线分析颗粒细胞GOLPH3蛋白和GOLPH3 mRNA表达水平预测临床妊娠的曲线下面积分别为0.808（P<0.001）、0.706（P=0.004）。结论:1.PCOS患者受精率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率较对照组降低,颗粒细胞促凋亡因子表达水平上升,提示PCOS患者卵母细胞质量下降。2.PCOS患者颗粒细胞GOLPH3表达水平下降,抗凋亡因子BCL-2表达水平下降,促凋亡因子BAX、凋亡效应因子Caspase-3表达水平上升,GOLPH3蛋白与BCL-2蛋白呈正相关,与BAX蛋白、Caspase-3蛋白呈负相关,提示PCOS患者GOLPH3表达下降可能影响了凋亡相关因子（BCL-2、BAX、Caspase-3）表达异常,导致颗粒细胞凋亡增加,进而使卵母细胞质量下降。3.GOLPH3表达水平升高预示良好的妊娠结局,GOLPH3表达水平的高低或许可作为预测PCOS患者妊娠结局的指标之一。