灰树花（Grifola frondosa）是一种中温型、好氧真菌,其中富含的灰树花多糖在抗病毒、免疫调节以及抗肿瘤等方面有显著的生物学活性。本论文以灰树花干物质为原料,对纤维素酶-木瓜蛋白酶微波水提得到的粗多糖（S-GFP）和低温碱提得到的粗多糖（J-GFP）,进行sevage法去蛋白、001*7大孔树脂脱色后,采用DEAE-52纤维素层析柱分离出4种精制多糖。对得到的4种精制多糖进行纯度鉴定、结构初探和酸水解产物测定,并对其体外抗氧化性进行研究。在单因素实验基础上,响应面优化得到纤维素酶-木瓜蛋白酶微波水提灰树花多糖最佳提取工艺为微波时间7 min、料水比1:27、酶配比1:1、酶料比2%,此条件下,灰树花粗多糖S-GFP的理论提取含量为75.58 mg/g,3次提取平均含量为73.25 mg/g,相对偏差为3.17%。低温碱提灰树花多糖最佳提取工艺为料液比1:55、Na OH浓度0.46mol/L、浸提时间2.15 h,此条件下,灰树花粗多糖J-GFP的理论提取含量为128.64mg/g,3次提取平均含量为123.29 mg/g,相对偏差为4.33%。两种方法的最佳工艺条件应用于灰树花多糖的提取,并对得到的粗多糖采用sevage法去蛋白、001*7大孔树脂脱色、DEAE-52纤维素层析柱分离组分,得到4种精制多糖S-GFP1、S-GFP2、J-GFP1、J-GFP2。对提取到的灰树花精制多糖进行纯度鉴定、结构初探和酸水解产物测定（高效液相色谱质谱法）。纯度鉴定结果表明,糖含量分别为96.23%、95.37%、97.95%、89.29%;紫外扫描表明4种精制多糖均不含蛋白质和核酸物质;高效液相色谱分析结果表明S-GFP1、S-GFP2、J-GFP1为均一多糖。S-GFP1、S-GFP2、J-GFP1的结构初探结果为:相对分子量分别为1845.48 k Da、29.69 k Da、4.99 k Da;红外光谱测定S-GFP1、J-GFP1为α型吡喃糖,S-GFP2为β型吡喃糖,其中S-GFP2、J-GFP1中含有羧基,S-GFP2、S-GFP1含有磷酸基团;刚果红实验表明,S-GFP2和J-GFP1具有三螺旋结构,S-GFP1不具有三螺旋结构。将S-GFP1、S-GFP2、J-GFP1用3 mol/L盐酸水解1h后,经Agilent Polaris 3 NH2色谱柱（2.0 mm×150 mm）分离,以10 mmol/L甲酸铵溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,电喷雾负离子（ESI-）多反应监测模式检测酸水解产物组成。结果表明,产物均含有葡萄糖（30.80%-35.43%）、半乳糖（33.19%-39.41%）、阿拉伯糖（0.10%-2.22%）、鼠李糖（5.05%-14.72%）和蔗糖（11.02%-13.00%）。S-GFP2中存在葡萄糖醛酸（5.21%）,J-GFP1中检出棉子糖（19.31%）。灰树花多糖S-GFP、J-GFP、S-GFP1、S-GFP2、J-GFP1体外抗氧化结果显示:最大还原力分别为0.43、0.49、0.82、1.01、0.67;最大DPPH自由基清除率分别为25.84%、13.39%、23.54%、50.38%、23.59%;最大超氧阴离子自由基清除率分别为54.88%、62.36%、79.23%、87.23%、78.34%;最大羟基自由基清除率分别为77.88%、68.28%、81.59%、90.21%、85.02%。总的来说,灰树花多糖的还原力和对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力较强,对DPPH自由基的清除能力较弱。整体趋势为灰树花精制多糖抗氧化效果优于灰树花粗多糖;纤维素酶-木瓜蛋白酶微波水提灰树花多糖抗氧化效果优于低温碱提灰树花多糖。